土壤芳基硫酸酯酶活性检测试剂盒

土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

货号：BC3990

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：甲苯自备；

2、 试剂三：临用前取1瓶加入10mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存一周，避免反复冻融；

3、 标准品：5mmol/L的对硝基苯*溶液。临用前用试剂二将标准品稀释50倍得100μmol/L的标准溶液。（具体稀释过程见操作步骤）

产品说明：

土壤芳基硫酸酯酶来自于土壤微生物，能酶促土壤有机硫化物转化为植物可吸收的无机态硫，在硫素的生物化学循环和植物的硫营养代谢中具有重要的作用，是反映土壤质量的一个重要生物学指标。

S-ASF能够催化对-硝基苯硫酸钾生成对-硝基苯*，后者在410nm有特征光吸收。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、恒温水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研钵、冰、30-50目筛、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min，波长调至410nm，蒸馏水调零。

2、 标准溶液的稀释：取20μL 5mmol/L的对硝基苯*溶液，加入980μL试剂二，充分混匀，配制成100μmol/L标准液待测，现用现配。（实验中每管需要500μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3、 加样表：

充分混匀，常温静置2min后，吸取1mL反应液于1mL玻璃比色皿中，测定吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A 测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管。标准管和空白管只需检测1-2次。

三、S-ASF活力计算

单位的定义：每天每g土样中产生1μmol对-硝基苯*定义为一个酶活力单位。

S-ASF活力（U/g 土样）=ΔA测定÷ (ΔA标准÷C标准)×V反总÷W÷T=2.28×ΔA测定÷ΔA标准÷W

T：反应时间，1h=1/24d；V反总：反应体系总体积：9.5×10^-4L；C标准：标准溶液浓度，100μmol/L；W：样本质量，g。

实验实例：

1、 分别称取两管0.1g三叶草土样，分别记为测定管和对照管，按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.627-0.108=0.519，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.568-0.002=0.566，计算酶活得：

S-ASF活力（U/g 土样） =0.456×ΔA测定÷ΔA标准÷W=2.28×0.519÷0.566÷0.1=20.9067 U/g 土样。

2、 分别称取两管0.1g土样，分别记为测定管和对照管，按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.442-0.102=0.34，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.568-0.002=0.566，计算酶活得：

S-ASF活力（U/g 土样） =0.456×ΔA测定÷ΔA标准÷W=2.28×0.34÷0.566÷0.1=13.69611 U/g 土样。

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