酪*酸解氨酶（TAL）活性检测试剂盒 抗氧化

酪*酸解氨酶（TAL）活性检测试剂盒说
明书
紫外分光光度法
货号：BC4060
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
试剂二：临用前取1瓶加入5 mL蒸馏水和20 μL浓盐酸（37%）充分溶解待用。现配现用。2-8℃保存4周。
产品说明：
酪*酸解氨酶（TAL）广泛存在于植物和微生物中，是苯丙*酸次生代谢途径的关键酶之一。TAL能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶（C4H）直接将酪*酸转化为香豆酸，香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。
TAL能够分解酪*酸产生香豆酸，其在310nm下有吸收峰，根据吸光度的变化率可计算出TAL活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、细胞超声破碎仪、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰、浓盐酸（37%）和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或细菌加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200w，超声3s，间隔10s，重复30次）。12000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤

1. 紫外分光光度计预热30min以上，波长调至310nm，蒸馏水调零。

2. 加样表（在1mL石英比色皿中分别加入）

将上述试剂分别加入比色皿后迅速吹打混匀，记录第10s的吸光值A1，迅速置于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴或培养箱中3min，拿出迅速擦干测定3min10s时的吸光值A2，计算ΔA =A2 -A1。
三、TAL酶活计算
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟在310nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活性单位。
TAL（U/mg prot）=ΔA÷0.01×V反总÷(V样×Cpr)÷T=333×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算：
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟在310nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活性单位。
TAL（U/g 质量）=ΔA÷0.01×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T=333×ΔA÷W
3、按细胞或细菌数量计算：
单位的定义：每10⁴个细胞或细菌在反应体系中每分钟在310nm下吸光度变化0.01定义为一个酶活性单位
TAL（U/10⁴ cell）=ΔA÷0.01×V反总÷(500÷V提取×V样)÷T=0.667×ΔA
V反总：反应总体积，1mL；V样：加入的样本体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V提取：提取液体积，1mL；500：500万个细胞；T：反应时间，3min。
注意事项：
当ΔA大于0.2或者A1大于1.5时，建议将样本用蒸馏水稀释后测量；ΔA过小时，建议增加酶促反应时间（5min或10min）或增加加入的样本体积来测定。计算时注意同步修改计算公式。（计算时注意同步修改计算公式）
实验实例：

1. 取0.1g稗草叶加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清稀释3倍后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=A2-A1=0.253-0.243=0.01，按样本质量计算酶活得：

TAL（U/g 质量）=333×ΔA÷W×F（稀释倍数）=333×0.01÷0.1×3=99.9 U/g 质量。
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