吲哚乙酸氧化酶活性检测试剂盒 微量法

吲哚乙酸氧化酶活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC4105
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前加入5 mL蒸馏水备用，2-8℃保存两周。

2. 试剂三：临用前加入5.71 mL 50% 乙醇（乙醇（V）：H₂O（V）=1：1）溶解备用。可以-20℃分装保存两周，避免反复冻融。

3. 试剂五：临用前加入10 mL试剂四溶解备用，2-8℃保存两周。

4. 标准品：10 mg吲哚乙酸。临用前加入1.14 mL 50%乙醇（乙醇（V）：H₂O（V）=1：1）溶解制成50 μmol/mL的标准溶液，-20℃分装保存两周，避免反复冻融。

产品说明：
吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。IAA氧化酶能调节植物体内吲哚乙酸的的水平，从而影响植物的生长。
IAA在无机酸条件下与FeCl₃作用生成红色产物，在530nm下有最大吸收峰。酶活力的大小可用消耗IAA的速率表示。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/超声破碎仪、乙醇、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：
1、当ΔA大于0.4或者A对照管大于1时，建议将样本用提取液稀释后进行测定；ΔA过小时，可增加酶促反应时间（1h或2h）或增加加入的样本体积来测定。注意同步修改计算公式。
2、试剂一溶解变黑后则不能使用；试剂二有毒性，做好防护措施。
实验实例：

1. 取0.1g红豆加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定=A对照-A测定=0.477-0.402=0.075，带入标曲y=2.7049x-0.0154，得出x=0.0334，按样本质量计算酶活得：IAA酶活（U/g质量）=333×x÷W=333×0.0334÷0.1=111.22 U/g 质量。

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