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  • 莽草酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法
产品名称：

莽草酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法
产品品牌： SOLARBIO/索莱宝 价格：
厂商性质： 生产厂家 产品时间： 2024-04-12
储存条件
-20℃
莽草酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法
有效期
6个月
单位
盒
推荐
若使用96孔板测定，需使用96孔UV板，推荐货号YA0602
英文名称
Shikimic acid Dehydrogenase(SD) Activity Assay Kit
检测方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
规格
100T/96S
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产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝CAS详询
分子式详询纯度详询
分子量详询货号BC4185
规格100T/96S供货周期现货
主要用途莽草酸脱氢酶(SD)活性检测应用领域环保,化工,生物产业,农业,综合


莽草酸脱氢酶（SD）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号: BC4185
规格: 100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件
提取液液体100 mL×1瓶2-8℃保存
试剂一液体10 mL×1瓶2-8℃保存
试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存
试剂三粉剂×1瓶-20℃保存
溶液的配制：

  1. 提取液：内含不溶物，用前摇匀。

  2. 试剂二：临用前加入5 mL蒸馏水溶解。

  3. 试剂三：临用前每瓶加入10 mL蒸馏水溶解。

  4. 工作液的配制：根据用量按照试剂一：试剂二：试剂三为7:4:8的体积比例充分混匀，备用，用前25℃预热15min。

产品说明：
莽草酸途径是存在于植物和微生物中的一条重要的代谢途径，莽草酸脱氢酶(EC 1.1.1.25) 是莽草酸合成代谢途径中催化第四步反应的关键酶。
莽草酸脱氢酶催化莽草酸和NADP产生NADPH，检测340nm下的吸光值增加速率来表示SD活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（加入前摇匀））进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
2、细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3、液体：直接检测。
二、测定步骤

  1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，紫外分光光度计蒸馏水调零。

  2. 工作液25℃预热10min以上。

  3. 操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂：

试剂名称空白管测定管
工作液（µL）190190
样本（µL）
10
蒸馏水（µL）10
加入样本即开始计时，充分混匀后于340nm处测定20s时的吸光值A1和5min20s时的吸光值A2，计算ΔA测定管=A2测定-A1测定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。
三、SD酶活计算
A、按微量石英比色皿计算：

  1. 按蛋白浓度计算

酶活定义：每毫克蛋白每分钟产生 1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×Cpr）÷T=643×ΔA÷Cpr

  1. 按样本质量计算

酶活定义：每克样本每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD酶活（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T=643×ΔA÷W

  1. 按细胞数量计算

酶活定义：每104个细胞每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD酶活（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量（万个））÷T
=643×ΔA÷细胞数量（万个）

  1. 按液体体积计算

酶活定义：每mL液体样本每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷V样÷T=643×ΔA
ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，2×10-4L；V样：反应体系中样本体积，0.01mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min；109：单位换算系数，1mol=109nmol；V样总：加入提取液体积，1mL。
B、按96孔UV板计算：
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm（96孔板光径）进行计算即可。

注意事项：

  1. 样本提取上清液置于冰上待测，且样本提取完成后建议2h内测完。

  2. 样本的蛋白浓度需自行测定，由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1 mg/mL），所以测定样本蛋白浓度时需扣除提取液自身蛋白浓度。

  3. ΔA大于1时，建议将样本稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时，可以延长反应时间（10min或15min）来测定。

  4. 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。

实验实例：

  1. 取0.1g稗草，加入1mL提取液，进行样本处理，取上清按照测得步骤操作，用微量石英比色皿测得计算ΔA测定管=A2测定-A1测定=0.2771-0.2433=0.0338，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.0338，按照样本质量计算得：SD酶活（U/g 质量）=643×ΔA÷W=217.334 U/g 质量。

相关系列产品：
BC2030/BC2035 异柠檬酸裂解酶（ICL）活性检测检测试剂盒
BC3170/BC3175 乙酸激酶（ACK）活性检测试剂盒

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