支链淀粉含量检测试剂盒BC4270-50T/48S-北京索莱宝科技有限公司

品牌	SOLARBIO/索莱宝	CAS	详询
分子式	详询	纯度	详询
分子量	详询	货号	BC4270
规格	50T/48S	供货周期	现货
主要用途	支链淀粉含量检测	应用领域	环保,化工,生物产业,农业,综合

支链淀粉含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC4270
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	液体60 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	液体50 mL×1瓶（自备）	2-8℃保存
试剂三	液体30 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂四	-	2-8℃保存
试剂五	液体6 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂六	液体10mL×1瓶	2-8℃保存
标准品	粉剂×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

试剂二：*50 mL自备。
试剂四：提供125 mL空瓶一个；将试剂三：H₂O =9 mL：91 mL混匀，现用现配，2-8℃保存半年。
标准品：10 mg支链淀粉。临用前加入0.1 mL无水乙醇和0.9 mL试剂三，混匀后封口膜封口，沸水浴至溶解，即10 mg/mL的支链淀粉，2-8℃保存半年。

产品说明：
支链淀粉又称胶淀粉，一般由几千个葡萄糖残基组成，淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉产品的加工、物化特性、糊化温度等有着直接的影响。
支链淀粉和碘形成红紫色络合物，利用乙醇分开样本中的可溶性糖和淀粉，再用碘与其反应得到支链淀粉含量。

技术指标：
低检出限：0.0044 mg/mL
线性范围：0.0125-0.5 mg/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、天平、台式离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、*、无水乙醇、EP管。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取0.005g烘干样本，加入1mL试剂一，充分匀浆；
80℃水浴提取30min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀；
在步骤2沉淀中加入1mL试剂二（*）振荡 5min；3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀；
在步骤3沉淀中加入5mL试剂四充分溶解，90℃水浴10min，冷却后3000g，25℃离心5min，取上清待测。

二、测定步骤

分光光度计预热30min以上，调节双波长至530nm和755nm，蒸馏水调零。
标准液的稀释：将10 mg/mL的标准溶液用试剂四稀释至0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125 mg/mL标准溶液待测。
标准液稀释可参考下表：

序号	稀释前浓度（mg/mL）	标准液体积（µL）	试剂四体积（µL）	稀释后浓度（mg/mL）
1	10	100	1900	0.5
2	0.5	800	200	0.4
3	0.4	500	500	0.2
4	0.2	500	500	0.1
5	0.1	500	500	0.05
6	0.05	500	500	0.025
7	0.025	500	500	0.0125

备注：实验中每个标准管需200µL标准溶液。

操作表：(在1.5mL离心管中依次加入下列试剂)

试剂名称	测定管	标准管	空白管
样本（µL）	200	-	-
标准溶液（μL）	-	200	-
蒸馏水（µL）	-	-	200
试剂五（µL）	75	75	75
试剂六（µL）	50	50	50
蒸馏水（µL）	675	675	675
充分混匀，测定530nm和755nm处的吸光值，530nm下的测定管、标准管、空白管分别记为A测定、A标准和A空白，755nm下的分别记为A’测定、A’标准、A’空白，计算ΔA测定=（A测定-A空白）-（A’测定-A’空白），ΔA标准=（A标准-A空白）-（A’标准-A’空白）。标准曲线和空白管只需测定1-2次。

三、支链淀粉含量计算

标准曲线的建立

以支链淀粉标准溶液浓度为x轴（x，mg/mL），标准溶液对应的ΔA标准为y轴（y，ΔA标准），建立标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。

支链淀粉含量（mg/g 质量）=x×V样总÷W=5x÷W

V样总：加入试剂四体积，5mL；W：样本质量，g。
注意事项：

反应后建议在20min内检测完成防止褪色。
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。

实验实例：

取0.01g红豆于研钵中研碎，加入1mL试剂一，进行样本处理取上清3倍稀释后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=（A测定-A空白）-（A’测定-A’空白）=（0.370-0.045）-（0.233-0.015）=0.107，带入标准曲线y=0.7564x-0.0006计算x=0.1423，按样本质量计算含量得：

支链淀粉含量（mg/g 质量）=5x÷W×3（稀释倍数）=213.45 mg/g 质量。
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