脂蛋白酯酶（LPL）检测试剂盒 微量法

脂蛋白酯酶（LPL）活性检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC2445

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前加入1mL丙酮溶解备用，用不完的试剂-20℃保存4周。

2. 标准品：5 μmol/mL对硝基苯*标准溶液。临用前取30μL 5μmol/mL标准液，加入450μL试剂一，充分混匀，配制成0.3125μmol/mL标准液使用，现用现配（实验中每管需要30μL，为减小实验误差，故配制大体积）。

产品说明：

脂蛋白酯酶（Lipoproteinlipase，LPL）是甘油三酯降解的降速酶，可催化甘油三酯水解为脂肪酸和单酸甘油酯，主要在肝脏实质细胞中合成，在脂质代谢和转运中发挥重要作用。

脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯*，在400nm有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、EP管、冰、丙酮和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。

2、 操作表：在1.5mL EP管中进行下列操作：

三、LPL活性计算

1、血清（浆）LPL活力计算

单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫升血清每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯*为一个酶活力单位。

LPL（U/mL）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准

2、组织、细菌或细胞中LPL活力计算

（1）按样本质量计算

单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯*为一个酶活力单位。

LPL（U/g 质量）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷W÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯*为一个酶活力单位。

LPL（U/mg prot）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷（V提取×Cpr）÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷Cpr

（3）按细菌或细胞数量计算：

单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每10⁴个细胞每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯*为一个酶活力单位。

LPL（U/10⁴ cell）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷N÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷N

C标准：标准溶液浓度，0.3125μmol/mL；V提取：加入试剂一体积，1mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：细菌或细胞总数，以万计；1000：单位换算系数，1μmol=1000nmol。

注意事项：

1、 测定管加入试剂二后混变浑浊为正常现象。

2、 若A大于2，将粗酶液用试剂一稀释后再进行测定。

实验实例：

1、 取0.1g大鼠肌肉加入1mL试剂一，取上清后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA=A测定管- A对照管=0.367-0.128=0.239，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.378-0.046=0.332，按样本质量计算酶活得：

LPL（U/g 质量）= 31.25×ΔA÷ΔA标准÷W=31.25×0.239÷0.332÷0.1=224.96 U/g 质量。

2、 取兔血清直接按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA=A测定管- A对照管=0.750-0.152=0.598，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.378-0.046=0.332，按血清（浆）体积计算酶活得：

LPL（U/mL）=31.25×ΔA÷ΔA标准=31.25×0.598÷0.332=56.29 U/mL。

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