D-木糖含量检测试剂盒 微量法

D-木糖含量检测试剂盒说明书

微量法

货号：BC4395

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一的配制：临用前取一瓶试剂一A加入10mL试剂一B，溶解后备用，2-8℃保存1周，若试剂变黄色则已经变质，不能继续使用。

2、 标准品：10mg木糖。临用前加入1 mL蒸馏水配制成10mg/mL木糖标准溶液备用，2-8℃保存4周。

产品说明：

木糖是一种戊糖。天然D-木糖是以多糖的形态存在于植物中。木糖可以活化人体肠道内的双岐杆菌并促其生长，双歧杆菌是益菌，该菌越多越有益人体健康，食用木糖能改善人体的微生物环境，提高机体的免疫能力；同时木糖在小肠上段吸收后不参与体内的代谢，经肾脏排出。因此，D-木糖的吸收一直作为小肠吸收不良的重要功能指标。

D-木糖在强酸条件下水解产生糠醛，糠醛可与间苯*反应生成粉红色化合物，在554 nm处有特殊吸收峰，据此可由吸光值计算出样本中木糖的含量。

技术指标：

低检出限：0.0007 mg/mL

线性范围：0.0078-0.9 mg/mL

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、鼓风烘箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、30-50目筛、EP管、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、植物样本：将供试的植物样本在65℃的鼓风烘箱中烘干，研磨成粉状，过30-50目筛。按质量（g）：提取液体积（mL）1 : 50~100比例（建议称取10mg烘干样本，加入0.5 mL提取液），涡旋混匀，在100℃水浴锅中准确水解2 h，然后10000 rpm，室温离心15 min，弃沉淀，取上清液待测。

2、组织样本：按质量（g）：提取液体积（mL）1 : 5~10比例（建议称取0.05g样本，加入0.5 mL提取液），研磨匀浆后，在100℃水浴锅中准确水解2 h，然后于10000 rpm，室温离心15 min，弃沉淀，取上清液待测。

3、血清（浆）等液体样本：直接测定。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长至554 nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、 标准液的稀释：将标准品用蒸馏水稀释至0.8、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/mL的标准溶液备用。

3、 标准液稀释可参考下表：

实验中每个标准管需50µL标准溶液。

4、 操作表（在0.6 mL EP管中操作）：

三、D-木糖含量的计算

1、标准曲线的绘制：

根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。

2、D-木糖含量的计算：

（1）植物中木糖含量（mg/g）=x×V提取÷W1=0.5x÷W1

（2）组织中木糖含量（mg/g）=x×V提取÷W2=0.5x÷W2

（3）血清（浆）木糖含量（mg/mL）= x×V样÷V样=x

V样：加入样本体积，0.05 mL；V提取：加入提取液的体积，0.5 mL；W1：植物样本的质量，g；W2：组织样本的质量，g。

注意事项：

1、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

2、 试剂一B因有强烈刺激性气味，过多吸入对人体有害，故建议在通风橱中进行操作。

实验实例：

1、 称取0.05g卫矛茎加入0.5mL提取液进行样本处理，取上清后稀释2倍按照测定步骤操作，96孔板测得并计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.345-0.045=0.3，带入标准曲线y=1.5448x-0.0132，计算x=0.203，按照公式计算得：

植物中木糖含量（mg/g）=x×V提取÷W1×2（稀释倍数）=0.203×0.5÷0.05×2=4.06 mg/g。

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