土壤尿酸酶活性检测试剂盒 微量法

土壤尿酸酶活性检测试剂盒说明书

微量法

货号：BC4415

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、试剂一：自备甲苯；

2、试剂二：临用前按照试剂二A液︰试剂二B液= 1︰35的比例混合，根据样本量所需使用当天现配现用；

3、标准品：5 µmol/mL的尿酸溶液。

产品说明：

土壤尿酸酶是一种与核酸代谢有关的氧化还原酶，主要是将土壤中的核酸腺嘌呤与尿酸等物质转化成 素和尿囊酸，进而生成尿素供植物利用。

土壤尿酸酶能够催化尿酸生成 素、CO₂和H₂O₂，尿酸在284 nm有特征吸收峰，通过测定反应前后尿酸的减少量，来表示土壤尿酸酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、研钵、可调式移液器、微量石英比色/96孔UV板、冰、30~50目筛、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

操作步骤：

一、 样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

二、测定步骤

1、紫外分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长至284 nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、将5 µmol/mL标准溶液用蒸馏水倍比稀释为1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 µmol/mL标准溶液待用。

3、标准液稀释可参考下表：

备注：实验中每个标准管需60µL标准溶液。

4、加样表：

充分混匀，吸取200 μL于微量石英比色皿/96孔UV板中测定284 nm处吸光值，记为A测定管、A对照管、A无土管、A标准管和A空白管。计算ΔA=（A无土管-A空白管）-（A测定管-A对照管）、ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管，同一批次样本检测无土管、空白管只需检测1-2管，标准曲线只需测1-2次。

三、土壤尿酸酶活性计算

1、 标准曲线的绘制：

根据标准管的浓度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）。

2、 土壤尿酸酶活性的计算：

酶活定义：每天每g土样中消耗1 μmol的尿酸定义为一个酶活力单位。

土壤尿酸酶活力（U/g 土样）＝x×V反总÷W÷T=0.7625x÷W

T：反应时间，1 d = 24 h；V反总：反应体系总体积：0.7625 mL；W：样本质量，g。

实验实例：

1. 称取两管2-1-20号土样0.05g，按照操作步骤进行操作，使用微量石英比色皿测得计算ΔA测定=（A无土管-空白管）-（A测定管-A对照管）=（1.0928-0.0023）-（0.6852-0.0509）=0.4562，带入标准曲线y=1.6894x + 0.0016，  计算x=0.2691，按照计算公式计算酶活得：

土壤尿酸酶活力（U/g 土样）=0.7625x÷W=0.7625×0.2691÷0.05=4.1 U/g 土样。

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