细胞自噬染色检测试剂盒（MDC法）

细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

产品说明：
自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，终将吞噬物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长 355nm。阻断滤光片波长 512nm。细胞自噬染色检测试剂盒(MDC 法)，适用于培养细胞的自噬染色，又称为 MDC 染色液，可与EB 合用双染。

自备材料：
荧光显微镜、低速离心机、EB 、载玻片、盖玻片

操作步骤(仅供参考)：
(一)、MDC单独染色：
1、 用去离子水稀释10×Wash buffer1×。
2、 800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。
3、 加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度106/ml。
4、 取适量90μl的细胞悬液新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，轻轻混匀。
5、 室温避光染色15～45min。
6、 800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。
7、 加入100μl的Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。
8、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。

注:贴壁细胞可以不消化，直接去除培养液，用1×Wash buffer清洗后进行染色。MDC的量根据细胞数量进行调整。染色时间可适当延长根据染色结果进行调整，染色结束后，用1×Wash buffer清洗观察即可，不加Collection buffer。

(二)、与EB双染色：
1、用去离子水稀释10×Wash buffer1×。
2、800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。
3、加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度106/ml。
4、取适量90μl的细胞悬液新的EP管中，分别加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，轻轻混匀。
5、滴加于在玻片上，室温避光染色15～30min，加盖玻片。
6、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm)，计数并拍照。

相关文献：

《Effect of Gpx3 gene silencing by siRNA on apoptosis and autophagy in chicken cardiomyocytes.》 作者:Yafan Gong  Jie Yang  Jingzeng Cai  Qi Liu  Jun min Zhang  Ziwei Zhang 期刊:J. Cell. Physiol. 影响因子:4.522 PMID:30515791
《Upregulation of DAPK2 ameliorates oxidative damage and apoptosis of placental cells in hypertensive disorder complicating pregnancy by suppressing human placental microvascular endothelial cell autophagy through the mTOR signaling pathway》 作者:Yan Wang,Lian-Lian Liu,Yuan Tian,Yang Chen,Wen-Hui Zha,Yang Li,Fu-Ju Wu 期刊:Int. J. Biol. Macromol. 影响因子:4.784 PMID:30243997
 

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