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产品名称:

硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒辅酶系

产品品牌: 索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-10
硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒辅酶系
TrxR 是一种 NADPH 依赖的包含 FAD 结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员,与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR 与 GR 活性类似,催化 GSSG 还原生成 GSH,是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC1150
规格50管/48样供货周期现货
主要用途硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒辅酶系

硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC1150
规格:50T/48S

产品内容:
试剂一:液体 90mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 5 mL 蒸馏水溶解。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 5 mL 蒸馏水溶解。
试剂四:液体×1 支,-20℃避光保存。

产品说明:
TrxR 是一种 NADPH 依赖的包含 FAD 结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员,与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR 与 GR 活性类似,催化 GSSG 还原生成 GSH,是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。TrxR 催化 NADPH 还原 DTNB 生成 TNB 和 NADP+,TNB 在 412 nm 有特征吸收峰,但还原型谷胱甘肽与 DTNB 同样能反应生成 TNB,因此本试剂盒利用 2-乙烯吡啶抑制样品中原有的还原型谷胱甘肽,通过测定 412nm 波长处 TNB 的增加速率,即可计算 TrxR 活性。

自备仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、可调节移液器、研钵/匀浆器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

操作步骤:
一、粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。10000rpm,4℃离心10min,取上清置冰上待检测。
2. 细菌、细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3s,间隔7s,总时间3min),然后10000rpm,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 测定前将上清液与试剂四以50:1的体积比混匀(即取100µL上清液加入2µL试剂四混合)37℃水浴30min后冰上。

二、TrxR 测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min 后,调节波长到 412nm,用蒸馏水调零。
2. 试剂一在 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)预热 30min。
3. 空白管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 100µL 试剂二,100µL 试剂三,800µL 试剂一,迅速混匀后于 412 nm 测定 10 s 时吸光度,然后将比色皿放入 37℃水浴 5min 后混匀立即测定 310 s 吸光度,记为 A1 和 A2。△A 空白管=A2-A1。
4. 测定管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 100µL 试剂二,100µL 试剂三,700µL 试剂一,100µL 上清液,迅速混匀后于 412 nm 测定 10 s 时吸光度,然后将比色皿放入 37℃水浴 5min 后混匀立即测定 310s吸光度,记为 A3 和 A4。△A 测定管=A4-A3。

三、TrxR 活性计算:
(1)按蛋白浓度计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分钟生成 1nmol TNB 为一个酶活力单位。

TrxR(U/mg prot)=(△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T
=147×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每克样品每分钟生成 1nmol TNB 为一个酶活力单位。
TrxR(U/g 鲜重)=(△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样÷V 样总×W)÷T
=147×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:在25℃或者37℃中,每104个细胞每分钟生成1nmol TNB为一个酶活力单位。
TrxR(U/104 cell)=(△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总×109÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
= 147×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量

ε:TNB 在 412nm 处的摩尔消光系数,1.36 ×104 L/ mol/cm;
d:比色皿光径,1cm;
V 反总:反应体系总体积,1000µL=0.001L;
Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;
V 样:加入反应体系中上清液体积,100µL=0.1 mL;
T:反应时间,5 min;
W:样品鲜重,g;
V 样总:提取液体积,1mL;
细胞数量:以 104为单位,万个。

注意事项:
1、哺乳动物组织及血液制品 TrxR 活力测定时,一般须用蒸馏水稀释 5 倍左右;测定过程操作须迅速。
2、由于提取液中含有一定浓度的蛋白(约 0.1mg/mL),所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。

相关文献:

《Eriodictyol Attenuates Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury through the Activation of JAK2》 作者:Defang Li, Ning Lu, Jichun Han, Xiaoyu Chen, Wenjin Hao, Wenjuan Xu, Xiaona Liu, Lei Ye and Qiusheng Zheng 期刊:Frontiers in Immunology 影响因子:3.845 PMID:29441020
《Down-regulation of miR-320 exerts protective effects on myocardial I-R injury via facilitating Nrf2 expression.》 作者:Zhu XA, Gao LF, Zhang ZG, Xiang DK. 期刊:Eur Rev Med Pharmacol Sci 影响因子:2.721 PMID:30840298
 

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