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产品名称:

谷胱甘肽还原酶(GR)活性检测试剂盒 辅酶系

产品品牌: 索莱宝 价格: 480
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-10
谷胱甘肽还原酶(GR)活性检测试剂盒 辅酶系
GR 是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶,是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中 GR 被 TrxR 取代)。GR 催化NADPH 还原 GSSG 生成 GSH,有助于维持体内GSH/GSSG比值。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC1165
规格100管/96样供货周期现货
主要用途谷胱甘肽还原酶(GR)活性检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

谷胱甘肽还原酶(GR)活性检测试剂盒 辅酶系

产品名称:谷胱甘肽还原酶(GR)活性检测试剂盒  微量法

产品英文名 Micro Glutathion Reductases(GR) Assay Kit

产品货号:BC1165          产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格:100管/96样            产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            参考价格:900
库存状态:现货                          
关键字:谷胱甘肽还原试剂盒|活性检测试剂盒|GR活性检测|试剂盒|微量法

简要介绍:
GR 是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶,是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中 GR 被 TrxR 取代)。GR 催化NADPH 还原 GSSG 生成 GSH,有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR 在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用,此外 GR还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。
    GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH,同时不断消耗NADPH生成NADP+;NADPH在340nm有特征吸收峰,相反NADP+在该波长无吸收峰;通过测定340nm吸光度下降速率;来测定NADPH脱氢速率,从而计算GR活性。



产品详细描述
产品内容
试剂一:液体120mL×1瓶,4保存。
试剂二:液体1mL×1支,4保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4保存。临用前加入2.0mL蒸馏水,混匀。
产品说明
GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶,GR催化GSSG还原生成GSH,是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中GRTrxR取代)。GR催化NADPH还原GSSG生成GSH,有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用,此外GR还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。
GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH,同时NADPH脱氢生成NADP+NADPH340 nm有特征吸收峰,相反NADP+在该波长无吸收峰;通过测定340 nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率,从而计算GR活性。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)和蒸馏水
操作步骤:
一、粗酶液提取:
称约0.1g组织,加入1.0 ml试剂一,冰上充分研磨,10000rpm 4离心10min,取上清液,待测。
二、GR测定操作:
1. 分光光度计或酶标仪预热30 min以上,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂一置于25(普通物质)或者37(哺乳动物)中预热30min以上。
3. 空白管:取微量石英比色皿或96孔板,加入10μL试剂二,20μL试剂三,170μL试剂一,于340nm测定10s190s吸光度,记为A1A2
4. 测定管:取微量石英比色皿或96孔板,加入10μL试剂二,20μL试剂三,20μL上清液,150μL试剂一,于340nm测定10s190s吸光度,记为A1A2
注:样品测定10s时吸光度后,将比色皿放入25℃(普通物质)或者37℃(哺乳动物)水浴,3min后拿出,吸打混匀,立即测定190s时的吸光度。
三、GR活性计算:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1)按蛋白浓度计算
活性单位定义:在一定温度中,pH8.0条件下,每毫克蛋白每分钟催化1μmol NADPH氧化为一个酶活力单位。
GR酶活(U/mg prot)= [ (A测定管-A空白管)÷(ε×d)×V反总×106] ÷Cpr×V样)÷T
= 0.536×(A测定管-A空白管)÷Cpr
2)按样本鲜重计算
活性单位定义:在一定温度中,pH8.0条件下,每克样品每分钟催化1μmol NADPH氧化为一个酶活力单位。
GR酶活(U/g 鲜重)= [ (A测定管-A空白管)÷(ε×d)×V反总×106] ÷(V÷V样总×W)÷T
= 0.536×(A测定管-A空白管)÷W
A空白管=A1-A2A测定管=A1-A2εNADPH摩尔消光系数6.22×103L/mol/cmd:比色皿光径,1 cmV反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 L1061 mol=1×106μmol Cpr:上清液蛋白浓度(mg/mL);W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL =2×10-2 mLV样总:提取液体积,1 mLV样总:提取液体积,        1 mLT:反应时间,3 min
b.使用96孔板测定的计算公式如下
1)按蛋白浓度计算
活性单位定义:在一定温度中,pH8.0条件下,每毫克蛋白每分钟催化1μmol NADPH氧化。
GR酶活(U/mg prot)= [ (A测定-A空白)÷(ε×d)×V反总×106Cpr×V样)÷T
   =0.893×(A测定管-A空白管)÷Cpr
2)按样本鲜重计算
活性单位定义:在一定温度中,pH8.0条件下,每克样品每分钟催化1μmol NADPH氧化。
GR酶活(U/g鲜重)= [(A测定管-A空白管)÷(ε×d)×V反总×106]÷(V÷V样总×W÷T
          =0.893×(A测定管-A空白管)÷W
A空白管=A1-A2A测定管=A1-A2εNADPH摩尔消光系数6.22×103L/mol/cmd96孔板光径,0.6 cmV反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 L1061 mol=1×106μmol Cpr:上清液蛋白浓度(mg/mL);W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL =2×10-2 mLV样总:提取液体积,1 mLV样总:提取液体积,1 mLT:反应时间,3 min
注意事项:
1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力,匀浆液避免反复冻融;
2)试剂三须现配现用,配置完后,置于冰上;
3)测定前须先用12个样做预实验,确保180s内吸光值变化呈线性,哺乳动物组织一般须用试剂一稀释25倍;
4)细胞中GR活性测定时,细胞数目须在300-500万之间,细胞中GR的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞。

谷胱甘肽还原酶(GR)活性检测试剂盒 辅酶系

 

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