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  • NADP苹果酸酶(NADP-ME)测试盒 辅酶系列
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产品名称:

NADP苹果酸酶(NADP-ME)测试盒 辅酶系列

产品品牌: 索莱宝 价格: 420
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-10
NADP苹果酸酶(NADP-ME)测试盒 辅酶系列
ME 广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中,尤其在植物组织中活性较高。ME 催 化苹果酸氧化脱羧的可逆反应,产生丙tong酸和 CO2,以及伴随 NAD(P)+的还原反应,是苹果酸代谢 的关键酶。ME 活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物 ME 活性测定较多,已经成为抗氧 化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同,可将 ME

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC1120
规格50管/48样供货周期现货
主要用途NADP苹果酸酶(NADP-ME)活性检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

NADP苹果酸酶(NADP-ME)测试盒 辅酶系列

产品名称:NADP苹果酸酶(NADP-ME)活性检测试剂盒

产品英文名: NADP Malic Enzyme(NADP-ME) Assay Kit

产品货号:BC1120         产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格:50管/48样         产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            参考价格:420
库存状态:现货                          
关键字:NADP苹果酸酶试剂盒|活性检测试剂盒|NADP-ME活性检测|试剂盒

简要介绍:
ME 广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中,尤其在植物组织中活性较高。ME 催 化苹果酸氧化脱羧的可逆反应,产生丙tong酸和 CO2,以及伴随 NAD(P)+的还原反应,是苹果酸代谢 的关键酶。ME 活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物 ME 活性测定较多,已经成为抗氧 化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同,可将 ME 分为 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+还原成 NADPH,在 340nm 下测定 NADPH 增加速率。

产品详细描述
产品内容:
提取液:液体 70mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 40mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 20mL 提取液充分溶解备用;
试剂三:粉剂×2 支,4℃保存;用时每支加 1mL 双蒸水充分溶解备用;
试剂四:粉剂×2 支,-20℃保存;用时每支加 500μL 双蒸水充分溶解备用。
工作液:在 15mL 试剂二中加入 2mL 试剂三和 1mL 试剂四,可以根据比例现用现配。 产品说明:
ME 广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中,尤其在植物组织中活性较高。ME 催 化苹果酸氧化脱羧的可逆反应,产生丙tong酸和 CO2,以及伴随 NAD(P)+的还原反应,是苹果酸代谢 的关键酶。ME 活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物 ME 活性测定较多,已经成为抗氧 化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同,可将 ME 分为 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+还原成 NADPH,在 340nm 下测定 NADPH 增加速率。 
试验中所需的仪器和试剂: 紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 石英比色皿、匀浆器和蒸馏水 

操作步骤: 

  • 粗酶液提取:

细菌、细胞或组织样品的制备: 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清,按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取 液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。8000g 4℃离心 10min, 取上清,置冰上待测。
组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置 冰上待测。 血清(浆)样品:直接检测。

  • 测定步骤:
  • 紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长 340nm,蒸馏水调零。
  • 将试剂一在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)中保温 15min 左右。
  • 操作表:
试剂名称(μL)测定管
试剂一600
工作液270
样本30

将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,混匀后在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种), 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和反应 1min 后的吸光度 A2,计算ΔA=A2-A1。

注意事项

  1. 若 A2-A1 大于 0.5,需将酶液用提取液稀释,使 A2-A1 小于 0.5,可提高检测灵敏度。
  2. 实验时,试剂三、试剂四和样本在冰上放置,以免变性和失活。试剂一 37℃或 25℃水浴放置。
  3. 比色皿中反应液的温度必须保持 37℃或 25℃,取小烧杯一只装入一定量的 37℃或 25℃蒸馏水, 将此烧杯放入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
  4. 两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。
  5. 如果ΔA<0.01,可将反应时间延长到 5 分钟或 10 分钟。

 

  • NADP-ME 活性计算:
  • 组织中 NADP-ME 活力的计算:
  • 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
NADP-ME(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(Cpr×V 样) ÷T=4823×ΔA÷Cpr

  1. 按样本鲜重计算:

单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
NADP-ME(U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(V 样÷V 样总×W) ÷T =4823×ΔA÷W

  1. 细菌或细胞中 NADP-ME 活力的计算:
  2. 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
NADP-ME(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(Cpr×V 样) ÷T=4823×ΔA÷Cpr

  1. 按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力 单位。
NADP-ME(U/10 4 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(V 样÷V 样总×500) ÷T=9.65×ΔA。

  1. 血清中 NADP-ME 活力的计算:

单位的定义:每 mL 血清在反应体系中每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
NADP-ME(U/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷V 样÷T =4823×ΔA。 V 反总:反应体系总体积,9×10 -4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×10 3L/mol/cm;d:比色 皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.03 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间, 1min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

相关文献:
《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu, Pengsong Li,Lei Zhang, Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影响因子:3.67 PMID:30673809

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