品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | 货号 | BC0220 |
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规格 | 50管/48样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 抗坏血酸过氧化物酶活性测定 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,石油 |
抗坏血酸过氧化物酶(APX)测试盒 维生素C
货号:BC0220
规格:50管/48样
产品简介:
APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H2O2 氧化AsA,是植物AsA的主要消耗者。APX 的活性直接影响到AsA 的含量,在胁迫和解胁迫条件下,APX 与AsA 具有一定的负相关性。
APX催化H2O2氧化AsA,通过测定AsA 的氧化速率,可计算得APX 活力。
试验中所需的仪器和试剂:
低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
产品内容:
试剂一:液体×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入5mL双蒸水充分溶解;
试剂三:液体×1支,4℃保存。
操作步骤:
一、粗酶液提取 :
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。13000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。
二、测定操作表:
1. 分光光度计预热30 min以上,调节波长到290 nm,用蒸馏水调零。
2. 试剂一在25℃中预热30min以上。
3. 空白管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸馏水、700μL预热的试剂一、100μL试剂二和100μL试剂三,迅速混匀后在290nm测定10 s和130 s光吸收A1和A2,△A空白管=A1-A2。
4. 测定管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、700μL预热的试剂一、100μL试剂二和100μL试剂三,迅速混匀后在290nm测定10 s和130 s光吸收A3和A4,△A测定管=A3-A4。
APX活力计算:
(1) 按样本蛋白浓度计算
活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA 为1U。
APX(U/mg prot) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T
=1.79×(△A测定管-△A空白管) ÷ Cpr
ε:AsA在290nm处摩尔吸光系数为2.8×103L/mol/cm;d:比色皿光径(cm),1 cm;V反总:反应体系总体积(L),1000μL=1×10-3 L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),100μL=0.1 mL;T:催化反应时间(min),2min。
(2)按样本质量计算
单位的定义:每g组织每分钟氧化1μmol AsA 为1U。
APX(U/g ) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(W×V样÷V样总)÷T
=1.79×(△A测定管-△A空白管) ÷W
ε:AsA在290nm处摩尔吸光系数为2.8×103 L/mol/cm;d:比色皿光径(cm),1 cm;V反总:反应体系总体积(L),1000μL=1×10-3 L;106:1mol=1×106μmol;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),100μL=0.1 mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W,样本质量,g;T:催化反应时间(min),2min。
相关文献:
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