果胶酯酶检测试剂盒 常量法

果胶酯酶（PE）活性检测试剂盒说明书

NaOH滴定法

货号：BC2700

规格：50T/48S、100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

50T溶液的配制：

1、 提取液：临用前加入100mL蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂4℃避光可保存3个月；

2、 试剂一：临用前加入100mL蒸馏水，磁力搅拌50℃加热溶解3小时左右至全溶解，转移至250mL容量瓶，蒸馏水定容至250mL；用不完的试剂4℃可保存8周；（因试剂一较难配制，建议客户提前制备）

3、 试剂三工作液：临用前根据样本量取出部分试剂三，用蒸馏水稀释16倍得到试剂三工作液备用，现配现用，用不完的试剂4℃可保存1周；

100T溶液的配制：

1、 提取液：临用前取1瓶加入100 mL蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂4℃避光可保存3个月；

2、 试剂一：临用前加入100mL蒸馏水，磁力搅拌50℃加热溶解3小时左右至全溶解，转移至500mL容量瓶，蒸馏水定容至500mL；用不完的试剂4℃可保存8周；（因试剂一较难配制，建议客户提前制备）

3、 试剂三工作液：临用前根据样本量取出部分试剂三，用蒸馏水稀释16倍得到试剂三工作液备用，现配现用，用不完的试剂4℃可保存1周；

产品说明：

果胶酯酶（Pectinesterase，PE），又称果胶甲基酯酶、果胶氧化酶，广泛存在于植物及微生物中。果胶是构成植物细胞壁的主要成分之一，而果胶酯酶催化果胶的甲氧酯水解产生果胶酸和甲醇，在植物果实成熟的细胞壁代谢过程中发挥着重要作用，在食品工业中具有极其重要的作用和开发前景。

果胶酯酶催化果胶水解的过程中释放H⁺，反应体系pH值降低，通过加入碱液维持反应体系pH始终维持在7.8维持pH所消耗的碱液量可反映果胶酯酶的活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果试剂三工作液消耗量过大或过小，建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、天平、研钵/匀浆器、10mL离心管或试管、容量瓶、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理

1、将研钵/匀浆器与提取液置于冰上或4℃预冷10min。

2、按照样本质量（g）：提取液体积（mL）=1:3~5的比例（建议称取约0.5g样本，加入1.5mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后，于4℃，12000g离心10min，弃沉淀，取全部上清液置于冰上待测。

二、测定步骤

1、 将试剂一置于37℃水浴锅中保温10min以上。

2、 依次在10mL离心管或试管中加入1mL上清液、25μL试剂二和4mL试剂一，充分混匀，用试剂三工作液调节pH至7.8（粉红色）。

3、 将上述离心管或试管置于37℃恒温培养箱/水浴锅中准确反应60min，每隔20min用试剂三工作液调节pH，使其维持在7.8（粉红色），并记录下所消耗试剂三工作液的体积，记为V（mL）。

三、果胶酯酶活性计算

酶活单位定义：每g组织样本每分钟消耗1μmol NaOH的量为一个酶活力单位。

PE活性（U/g 质量）=25×V÷V上清×V提÷W÷T×F=1.25×V×F

V：消耗试剂三工作液的体积，mL；V上清：加入的上清液体积，1mL；V提：加入的提取液体积，1.5mL；W：样本质量，g；T：反应时间，60min；F：稀释倍数。

注意事项：

1、 实验中酶促反应产生H⁺，此时溶液无色透明，需用试剂三调节pH到7.8（粉红色），即溶液会从无色透明突然变为粉红色。

2、 建议正式实验前进行预实验，其中测定步骤2中，将样本上清液、加入试剂二和试剂一混匀后，用试剂三工作液调节pH至7.8（粉红色）时，可适当调整每次加入试剂三工作液的体积，防止pH调过。

3、 若样本酶活性较高，可适当稀释样本上清液后再进行测定，计算酶活时乘以稀释倍数即可。若样本酶活性较低，建议客户加大样本量后重新进行测定，注意同步修改计算公式。

实验实例：

1. 称取0.51g苹果果肉加入1.5mL提取液进行冰浴匀浆，取1mL上清液于10mL离心管中按照测定步骤操作，最终计得调节pH所消耗试剂三工作液总体积为0.76mL，按样本质量计算酶活得：

PE活性（U/g 质量）=25×V÷V上清×V提÷W÷T=0.93 U/g 质量。

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