植物硝态氮检测试剂盒 氮代谢

植物硝态氮含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

货号：BC1500

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前根据用量每瓶加入2 mL浓硫酸充分溶解；配制好后尽快使用，2-8℃可保存一周。

2、 标准品：10 mg硝酸钾，临用前加入0.935 mL 蒸馏水溶解，配成1400 μg/mL的NO₃-N标准液。

产品说明：

硝酸盐是植物吸收的主要含氮物质之一。硝酸盐在植物体内的还原部位不同，可以在根内，也可以在枝叶内进行，且因植物类别和环境条件而异。因此，测定植物体内硝态氮含量变化对了解氮代谢机制有重要的意义。

在浓酸条件下，NO₃^-可以与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，后者在PH>12的条件下呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算硝态氮含量。

技术指标：

低检出限：0.7534 μg/mL

线性范围：0.875-84 μg/mL

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、浓硫酸、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，室温匀浆后置于90℃恒温水浴锅中浸提30min，期间不断晃动或者置于90℃恒温摇床中振荡提取30min，待冷却后于25℃，12000g离心15min，取上清待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。

2. 将1400μg/mL NO₃-N标准液用蒸馏水50倍稀释成28μg/mL的标准溶液。

3. 操作表：

三、植物NO₃-N的计算

1. 按样本质量计算

NO₃- N含量（μg/g 质量）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷W=28×ΔA÷ΔA标准÷W

2. 按样本蛋白浓度计算

NO₃- N含量（μg/mg prot）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷（Cpr×V提取）=28×ΔA÷ΔA标准÷Cpr

W：样本质量，g；C标准：标准溶液浓度，28μg/mL；V提取：样本总体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。

注意事项：

1．试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。

2．如果样本吸光值大于1.4，建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。

实验实例：

1、 取0.1g苹果加入1mL蒸馏水进行样本处理，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.560-0.002=0.558，ΔA标准管=A标准管-A空白管=0.563-0.01=0.553，按样本质量计算含量得：

NO₃-N含量（μg/g质量）=28×ΔA÷ΔA标准÷W=28×0.558÷0.553÷0.1=282.5 μg/g质量。

2、 取0.1g叶片加入1mL蒸馏水进行样本处理，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.907-0.645=0.262，ΔA标准管=A标准管-A空白管=0.563-0.01=0.553，按样本质量计算含量得：

NO₃-N含量（μg/g质量）=28×ΔA÷ΔA标准÷W=28×0.262÷0.553÷0.1=132.7 μg/g质量。

相关发表文献：

[1] Fuyuan Zhu,Moxian Chen,Wailung Chan,et al. SWATH-MS quantitative proteomic investigation of nitrogen starvation in Arabidopsis reveals new aspects of plant nitrogen stress responses. Journal of Proteomics. September 2018;(IF3.537)

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