丙酮酸（PA）含量检测试剂盒 糖酵解系列

丙酮酸(PA)含量检测试剂盒 糖酵解系列

货号：BC2200

规格：50管/48样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：
    丙酮酸通过乙酰 CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。

测定原理：
    丙酮酸与 2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。

需自备的仪器和用品：
    可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

试剂的组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 5mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：液体 25mL×1 瓶， 4℃保存。

丙酮酸提取：
    1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（10 4 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），静置 30min，8000g，25℃离心 10min，取上清待测。
    2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆，静置 30min，8000g，25℃离心 10min，取上清待测。
    3、血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议取 0.1mL 血清（浆）加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆，静置 30min， 8000g，25℃离心10min，取上清待测。

测定步骤：
    1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长 520nm，蒸馏水调零。
    2、取 300μL 样本+100μL 试剂一于 1.5mL EP 管中，混匀，静置 2min，加入 500μL 试剂二，混匀，于 520nm波长处测定管吸光值 A。

丙酮酸含量计算：
    1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0466x + 0.0675； x 为丙酮酸钠含量（µg/mL），y 为吸光值。
    2、按照血清（浆）体积计算
丙酮酸含量（μg/mL）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（V3×V1÷V2）=214.6×(A-0.0675)
    3、按照蛋白浓度计算
丙酮酸含量（μg/mg prot）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr
    4、按照样品质量计算
丙酮酸含量（µg/g 鲜重）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2）=21.46×(A-0.0675) ÷W

    3、按照细菌或细胞密度计算
丙酮酸含量（μg/10 4 cell）＝[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（500×V1÷V2）=0.043×(A-0.0675)V1：加入反应体系中样本体积，0.3mL；V2：加入提取液体积，1 mL；V3：加入血清（浆）体积，0.1 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

    注意：低检测限为 100μg/mL 或 或 100μg/g  鲜重或 1μg/mg prot

 相关文献：

 《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影响因子:5.959 PMID:30850587
《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu， Pengsong Li，Lei Zhang， Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影响因子:3.67 PMID:30673809
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影响因子: PMID:30453281

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