品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | 货号 | BC2200 |
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规格 | 50管/48样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 丙酮酸(PA)含量测定检测 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,石油 |
丙酮酸(PA)含量检测试剂盒 糖酵解系列
货号:BC2200
规格:50管/48样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
丙酮酸通过乙酰 CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢,起着重要的枢纽作用。
测定原理:
丙酮酸与 2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈樱红色。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:液体 25mL×1 瓶, 4℃保存。
丙酮酸提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量
(10 4 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),静置 30min,8000g,25℃离心 10min,取上清待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆,静置 30min,8000g,25℃离心 10min,取上清待测。
3、血清(浆)样品:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取 0.1mL 血清(浆)加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆,静置 30min, 8000g,25℃离心10min,取上清待测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长 520nm,蒸馏水调零。
2、取 300μL 样本+100μL 试剂一于 1.5mL EP 管中,混匀,静置 2min,加入 500μL 试剂二,混匀,于 520nm波长处测定管吸光值 A。
丙酮酸含量计算:
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0466x + 0.0675; x 为丙酮酸钠含量(µg/mL),y 为吸光值。
2、按照血清(浆)体积计算
丙酮酸含量(μg/mL)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V3×V1÷V2)=214.6×(A-0.0675)
3、按照蛋白浓度计算
丙酮酸含量(μg/mg prot)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr
4、按照样品质量计算
丙酮酸含量(µg/g 鲜重)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2)=21.46×(A-0.0675) ÷W
3、按照细菌或细胞密度计算
丙酮酸含量(μg/10 4 cell)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(500×V1÷V2)=0.043×(A-0.0675)V1:加入反应体系中样本体积,0.3mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
注意:低检测限为 100μg/mL 或 或 100μg/g 鲜重或 1μg/mg prot
相关文献:
《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影响因子:5.959 PMID:30850587
《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu, Pengsong Li,Lei Zhang, Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影响因子:3.67 PMID:30673809
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影响因子: PMID:30453281
丙酮酸(PA)含量检测试剂盒 糖酵解系列
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