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  • 丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒 微量法
产品名称:

丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒 微量法

产品品牌: 索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-06
丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒 微量法
测定意义:PK(EC 2.7.1.40)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化糖酵解过程中的后一步反应,是糖酵解过程中的主要限速酶之一,也是产生ATP的关键酶之一,因此测定PK活性具有重要意义。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0545
规格100管/96样供货周期现货
主要用途丙酮酸激酶(PK)活性检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒

操作步骤:

一、样本的前处理

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10 4个)提取液体积(mL)为 500-1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或者 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5-10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

二、测定步骤及加样表:

1. 分光光度计预热 30min 以上,调节波长 340nm,蒸馏水调零。

2. 样本测定

(1) 在试剂二瓶中加入 17ml 试剂一和 1ml 蒸馏水充分溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃ (其他物种)水浴 5 分钟,现配现用。

(2) 在试剂三中加入 1ml 蒸馏水充分溶解,冰上放置备用,现配现用。

(3) 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、10μL 试剂三和 180μL 试剂二,混匀,立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2,计算△A=A1-A2.

 

PK 活性计算: A.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

1、 血清(浆)PK 活力的计算:单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK(U/mL)=[△A×V 反总÷(ε×d)×10 9] ÷V 样÷T=1608×△A

2、 组织、细菌或细胞中 PK 活力的计算:

(1) 按样本蛋白浓度计算:单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK(U/mg prot)=[△A×V 反总÷(ε×d)×10 9] ÷(Cpr×V 样)÷T=1608×△A ÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK(U/g 鲜重)=[△A×V 反总÷(ε×d)×10 9] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1608×△A ÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK(U/10 4 cell)=[△A×V 反总÷(ε×d)×10 9] ÷(500×V 样÷V 样总)÷T=3.216×△A V 反总:反应体系总体积,2×10 -4L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×10 3L/mol/cm;d:比色皿光径, 1 cm;V 样:加入样本体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

B.用 96 孔板测定的计算公式如下:

1、 血清(浆)PK 活力的计算:单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK(U/mL)=[△A×V 反总÷(ε×d)×10 9] ÷V 样÷T=3216×△A 2、 组织、细菌或细胞中 PK 活力的计算:

(1) 按样本蛋白浓度计算:单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK(U/mg prot)=[△A×V 反总÷(ε×d)×10 9] ÷(Cpr×V 样)÷T=3216×△A ÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK(U/g 鲜重)=[△A×V 反总÷(ε×d)×10 9] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T=3216×△A ÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK(U/10 4 cell)=[△A×V 反总÷(ε×d)×10 9] ÷(500×V 样÷V 样总)÷T=6.432×△A V 反总:反应体系总体积,2×10 -4L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×10 3L/mol/cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,2min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

相关文献:

《Galangin and Pinocembrin from Propolis Ameliorate Insulin Resistance in HepG2 Cells via Regulating Akt/mTOR Signaling》 作者:Yinkang Liu, Xiali Liang,Gensheng Zhang,Lingjie Kong,Wenjun Peng and Hongcheng Zhang 期刊:Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 影响因子:1.984 PMID:30420897
 

丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒

提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:液体 20 mL×1 瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×1 支,-20℃保存;试剂三:液体×1 支,4℃保存;

丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒 微量法

丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒 微量法

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