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产品名称:

罗丹明标记鬼笔环肽 氨基酸与蛋白质

产品品牌: 索莱宝 价格: 1600
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-18
罗丹明标记鬼笔环肽 氨基酸与蛋白质
货号:CA1610
规格:300T
英文名称 : TRITC Phalloidin
别名 : 罗丹明鬼笔环肽
分子式 : C60H70N12O13S2
分子量 : 1231.4
外观(性状) : 紫色粉末(冻干粉)
单位 : 瓶

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号CA1610
规格300T供货周期现货
主要用途用来标记组织切片,细胞培养物或无细胞体系中的F-actin,从而对F-actin应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

罗丹明标记鬼笔环肽 氨基酸与蛋白质
货号:CA1610
规格:300T
英文名称 : TRITC Phalloidin 
别名 : 罗丹明鬼笔环肽 
分子式 : C60H70N12O13S2 
分子量 : 1231.4 
外观(性状) : 紫色粉末(冻干粉) 
单位 :

商品货号:商品品牌:规格基本售价:选择规格
CA1610-300TSolarbio300T1200.00元 

 

溶解性(Solubility):溶于DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液(20%)
多肽序列(Sequence):TRITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6)


背景描述
    鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)的环状七肽毒素,以高亲和力(Kd= 20 nM)选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin,而不会与单体肌动蛋白G-actin结合,通常用来标记组织切片,细胞培养物或无细胞体系中的F-actin,从而对F-actin进行定性和定量分析。另外,鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维,无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞,按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略,染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此,鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小,直径约12-15?,分子量<2000 Daltons,未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持,比如,同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能发生反应;鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质;以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。

 

    鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离,稳定微丝结构,从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降<1μg/mL,因此,可用作一种聚合促进剂。此外,鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。

 

    本品为TRITC(四甲基异硫氰酸罗丹明)标记的鬼笔环肽,染色反应特异性强,对比性高,具有比Actin抗体更好的染色效果,适合用作F-actin的定性和定量检测。另外,经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛。

 

    我司提供储存液形式(货号:CA1610,浓度为20μM)的TRITC标记鬼笔环肽,用户根据自身需求选择。建议使用浓度为80~200nM。


运输与保存方法

    冰袋运输。-20℃避光干燥保存, 1年有效。

 

注意事项

1)鬼笔环肽具有毒性,需小心操作(对人的半数致死剂量LD50约2mg/kg)。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

需要自备材料

1)(可选)甲醇
2)1×PBS缓冲液, pH 7.4, 细胞培养(货号:P1020)
3)固定液4%多聚甲醛(溶于PBS缓冲液)(货号:P1110)
4)丙酮或透化液0.5% Triton X-100(溶于PBS缓冲液)
5)Fluoromount-GTM 水溶性封片剂(不含DAPI),DAPI
6)(可选)DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片剂(含DAPI)
7)(可选)BSA,标准
8)载玻片和盖玻片
9)盖玻片周围密封液(如透明指甲油)
10)组装有TRITC激发/发射滤片,以及DAPI激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜

 

操作步骤

1. 工作液准备

    对于TRITC标记鬼笔环肽(货号:CA1610,300T)

    本品以溶于甲醇的20μM储存液形式提供,总量为300μl。按照100 nM的工作液浓度来换算,可制备总量为60 ml的工作液。建议收到产品后,根据单次使用量,对母液进行小量分装,-20℃避光冻存,一年稳定。

    开始实验前,使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为:80~200nM。工作液现配现用。

 

2.染色步骤

1)细胞爬片生长24h,使其密度达到50%汇合度。

2)吸掉培养液,37℃预热的1×PBS(pH 7.4)清洗细胞2次。

3)使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定,室温固定10min。

注意:避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

4)室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min。

5)室温条件下,用丙酮(≤-20℃)脱水或者用0.5% Triton X-100溶液透化处理5min。

6)室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min。

7)取200μl配制好的TRITC标记鬼笔环肽工作液,覆盖住盖玻片上的细胞,室温避光孵育30min(通常情况下,4℃~37℃孵育皆可)。

注意:为了降低背景,可于TRITC标记的鬼笔环肽工作液内加入1% BSA;另外,孵育过程中为了避免溶液挥发,可将盖玻片转移到一个密封的容器内。

8)用PBS清洗盖玻片3次,每次5min。

9)使用200μl DAPI溶液(浓度:100 nM)对细胞核进行复染,约30s。

10)用PBS清洗盖玻片,然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂,然后用指甲油*封片。此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存,通常6个月内可继续做F-actin染色分析。

注意:也可以直接使用含有DAPI的抗荧光淬灭封片剂(货号:36308ES11)合并步骤9)10),简化步骤。

11)荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察,选择TRITC激发/发射滤片(Ex/Em=545/570nm)和DAPI激发/发射滤片(Ex/Em=364/454nm)。

 相关文献:

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《Zoledronic acid inhibits osteoclast differentiation and function through the regulation of NF-κB and JNK signalling pathways》 作者:Xiao?Lin Huang, Lie?Yu Huang, Yu?Ting Cheng ,Fang Li ,Qian Zhou ,Chao Wu, Qian?Hui Shi, Zhi?Zhong Guan ,Jian Liao ,Wei Hong 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影响因子:2.928 PMID:31173157
 

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