己糖激酶(HK)活性检测试剂盒 糖酵解系列

己糖激酶（HK）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0740
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
1、试剂二：临用前加入30 mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存4周；
2、试剂四：临用前加入5mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周；
3、试剂五：临用前加入3mL 蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周；
4、试剂六：临用前取1支试剂六加入125 μL试剂一和125 μL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存2周。（该试剂为冻干试剂，可能存在肉眼观察试剂量相差较大甚至量很少的现象，此现象不影响使用，实际质量相同）
产品说明：
己糖激酶（Hexokinase，HK，EC 2.7.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是葡萄糖分解过程中的第一个关键酶，催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH 在340nm有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

注意事项：

1. 比色皿中反应液的温度必须保持37℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

2. 最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。

3. 不同匀浆组织中HK活力不一样，做正式试验之前请做1-2次预试验，若ΔA>0.5，则说明组织活力太高，必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液，或缩短反应时间至2min，使ΔA<0.5，以提高检测灵敏度。注意同步修改计算公式。

实验实例：

1. 称取约0.1g 鼠肾，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清用提取液稀释5倍后置冰上待测。之后按照测定步骤操作，用1mL石英比色皿测得计算A1=0.2252，A2=0.3084，ΔA=A2-A1=0.0832，计算己糖激酶活性得：HK活性（U/g 质量）=1113×ΔA÷W×稀释倍数=4630.08U/g 质量

2. 称取约0.1g 绿萝，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。之后按照测定步骤操作，用1mL石英比色皿测得计算A1=0.1949，A2=0.2184，ΔA=A2-A1=0.0235，计算己糖激酶活性得：HK活性（U/g 质量）=1113×ΔA÷W=261.56U/g 质量

相关发表文献：

1. Geng M T, Yao Y, Wang Y L, et al. Structure, expression, and functional analysis of the hexokinase gene family in cassava[J]. International journal of molecular sciences, 2017, 18(5): 1041.

2. Zhou F, Du J, Wang J. Albendazole inhibits HIF-1α-dependent glycolysis and VEGF expression in non-small cell lung cancer cells[J]. Molecular and cellular biochemistry, 2017, 428(1-2): 171-178.

3. Liu Y, Liang X, Zhang G, et al. Galangin and pinocembrin from propolis ameliorate insulin resistance in HepG2 cells via regulating Akt/mTOR signaling[J]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2018, 2018.

4. Jing Li,Yabing Duan,Chuanhong Bian,et al. Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance. Pesticide Biochemistry and Physiology. January 2019;153:152-160.(IF2.87)

参考文献：

1. Pancera S M, Gliemann H, Schimmel T, et al. Adsorption behavior and activity of hexokinase[J]. Journal of colloid and interface science, 2006, 302(2): 417-423.

2. [1] Galina A, da Silva WS. Hexokinase activity alters sugar-nucleotide formation in maize root homogenates[J]. Phytochemistry, 2000, 53(1): 29-37.

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