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产品名称:

糖酵解系列试剂盒己糖激酶(HK)测试盒

产品品牌: 索莱宝 价格: 620
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-09
糖酵解系列试剂盒己糖激酶(HK)测试盒
货号:BC0740
规格:50管/48样
HK(EC 2.7.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是葡萄糖分解过程中的*个关键酶,催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0740
规格50管/48样供货周期现货
主要用途己糖激酶(HK)活性检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

糖酵解系列试剂盒己糖激酶(HK)测试盒
货号:
BC0740
规格:50管/48样
 

测定意义
    HK(EC 2.7.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是葡萄糖分解过程中的*个关键酶,催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。


测定原理
     HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH,NADPH在340nm有特征吸收峰。


需自备的仪器和用品
    紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 30mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 30mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂 4℃
保存一周;
试剂三:液体 5 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1 支,-20℃保存,临用前加入 4mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂 4℃
保存一周;
试剂五:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前加入 2mL 蒸馏水充分溶解备用;现配现用;
试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前加入 250μL 试剂一和 250μL 蒸馏水充分溶解备用;
用不完的试剂 4℃保存一周;


样本的前处理
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量
(10 4 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,
加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。


测定步骤
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长 340nm,蒸馏水调零。
2、 将试剂一、二、三、四和五 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 10 分钟。
3、 加样表:

将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,立即混匀,加样本的同时开始计时,在 340 nm
波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒时的吸光度 A2,计算 ΔA=A2-A1。

 

注意事项
1、如果一次性测定样本数较多,可将试剂一、二、三、四、五和六按比例配成混合液,预
热 10min。
2、不同匀浆组织中 HK 活力不一样,做正式试验之前请做 1-2 只预试,若 ΔA>0.5,则说明
组织活力太高,必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液(计算公式中乘以相应稀释倍数),
或缩短反应时间 2min,使 ΔA<0.5,以提高检测灵敏度。
HK 活性计算
1、血清(浆)HK 活性
单位的定义:每毫升血清(浆)在每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9 ]÷V 样÷T=1113×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 HK 活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9 ]÷(V 样×Cpr) ÷T=1113×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9 ]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=1113×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min /10 4 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9 ]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=2.226×ΔA
V 反总:反应体系总体积,1.038×10 -3 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×10 3 L / mol /cm;
d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.03 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;
T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细
胞总数,500 万。

 相关文献:

《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
 期刊:Planta 影响因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影响因子:3.571 PMID:29845188
 

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