尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶活测试盒糖代谢

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UDPGT）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

货号：BC5810

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂五：临用前加入1.238mL蒸馏水，-20℃分装可保存4周，避免反复冻融；

2. 工作液：临用前根据样本量按照试剂二：试剂三：试剂四=80μL：80μL：80μL（0.24mL，2T）的比例配制，现用现配；

3. 标准品：5μmol/mL的对硝基 苯 *溶液。临用前取50μL 5μmol/mL对硝基 苯 * 溶液，加入950μL蒸馏水，配制成0.25μmol/mL对硝基 苯 *溶液，现用现配。

产品说明：

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（glucuronosyltransferase，UDPGT/UGT，EC 2.4.1.17）是一种结合在内质网上的膜蛋白，该酶催化葡萄糖醛酸基团从供体尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移至受体上，受体包括酚类、醇类、胺类和脂肪酸类。葡萄糖醛酸化代谢促进了药物和其他外源物质通过肾脏或胆汁的排泄，在生物体内代谢、解毒、清除过程中发挥重要作用。

UDPGT催化供体尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的葡萄糖醛酸基团转移至对硝基 苯 *，后者在405nm处有特征吸收峰，通过测定吸光值降低速率可计算UDPGT活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、分析天平、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、 样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 称取0.1g样本，加入1.0 mL提取液，用匀浆器或研钵于冰上匀浆；

2. 4℃，800g离心10 min，弃沉淀，留上清液，4℃，9000 g离心20 min，弃沉淀，留上清液；

3. 4℃，12000g离心60 min，弃上清，留沉淀。沉淀中加入0.5 mL提取液重悬，置于冰上待测。

二、 测定步骤

1．可见分光光度计预热30min以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零；

2．将试剂一37℃预热15min；

3．操作表（在EP管中加入下列试剂）：

三、UDPGT活性计算

1. 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白每min催化消耗1nmol对硝基 苯*定义为一个酶活单位。

UDPGT活性（U/mg prot）=（ΔA测定÷ΔA标准×C标准）×V样÷（Cpr×V样）×10³÷T

=25×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr

2. 按样本质量计算

单位的定义：每g组织每min催化消耗1nmol对硝基 苯*定义为一个酶活单位。

UDPGT活性（U/g 质量）=（ΔA测定÷ΔA标准×C标准）×V样÷（W×V样÷V样总）×10³÷T

=12.5×ΔA测定÷ΔA标准÷W

C标准：0.25μmol/mL；V样：反应体系中加入的样本体积，0.2mL；V样总：重悬沉淀加入提取液的体积，0.5mL；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；10³：单位换算系数，1μmol=10³nmol；T：反应时间，10min。

注意事项：

1. 如果∆A测定小于0.004或测定管吸光值接近对照管，可以增加样本量或者延长37℃反应时间后再进行测定；如果∆A测定大于0.9，建议将重悬液用提取液适当稀释后再进行测定。注意同步修改计算公式。

实验实例：

1. 取0.1027g新鲜小鼠肝脏样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，多次离心后加入0.5mL提取液重悬沉淀，按照测定步骤操作，用玻璃比色皿测得计算：ΔA测定=A对照-A测定=1.473-0.843=0.630，ΔA标准=A标准-A空白=0.741- 0.005=0.736，按样本质量计算得：

UDPGT活性（U/g 质量）=12.5×ΔA测定÷ΔA标准÷W =104.184 U/g 质量

参考文献：

[1] Visser TJ, Kaptein E, van Raaij JA. et al. Multiple UDP-glucuronyltransferases for the glucuronidation of thyroid hormone with preference for 3,3',5'-triiodothyronine (reverse T3) [J]. Federation of European Biochemical Societies Letters, 1993, 315(1): 65-68.

[2] Viollon-Abadie C, Lassere D, Debruyne E. et al. Phen obarbit al, beta-naphthoflavone, clofibrate, and pregnenolone- 16alpha-carbonitrile do not affect hepatic thyroid hormone UDP-glucuronosyl transferase activity, and thyroid gland function in mice [J]. Toxicology and Applied Pharmacology, 1999, 155(1): 1-12.

[3] Nicod L, Rodriguez S, Letang JM. et al. Antioxidant status, lipid peroxidation, mixed function oxidase and UDP-glucuronyl transferase activities in livers from control and DOCA-salt hypertensive male Sprague Dawley rats [J]. Molecular and Cellular Biochemistry, 2000, 203(1-2): 33-39.

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