游离血红蛋白（FHb）含量检测试剂盒 微量法

游离血红蛋白（FHb）含量检测试剂盒说明书

微量法

货号：BC559

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 工作液：临用前根据样本量按照试剂一：试剂二：试剂三=500μL：500μL：25μL（1.025mL，约4T）的比例配制工作液，现用现配。

2. 标准品：5mg血红蛋白，临用前加入1mL蒸馏水，充分混匀，配制成5mg/mL标准液，2-8℃可保存4周。

产品说明：

血管内发生溶血时，红细胞破裂，释放出血红蛋白，血浆中游离血红蛋白（free hemoglobin，FHb）增多。自身免疫性溶血性贫血、镰刀型细胞贫血、珠蛋白生成障碍性贫血患者血浆FHb有轻度至中度增加，阵发性睡眠性血红蛋白尿症、阵发性严寒性血红蛋白尿症、不稳定血红蛋白病等会出现血尿症状。因此，血浆中FHb的测定对于临床诊断溶血性疾病有重要作用。

血红蛋白中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的催化活性，能够催化过氧化氢氧化4-氨基安替*林和苯胺类似物，生成紫色化合物，其在546nm有特征吸收峰，其颜色深浅与FHb含量成正比。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、冰和蒸馏水。

操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

注意事项：

1. 若测定血浆样本，采样和分离血浆过程中避免发生溶血。

2. 若样本测定管吸光值A测定＞1，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。

3. 若样本测定管吸光值A测定＜0.01或接近空白管吸光值，建议将样本加样量增大后再进行测定，空白管和标准管加样量也需进行相应调整。

实验实例：

1. 取15µL兔血清样本，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算：ΔA测定=A测定-A空白= 0.195-0.096=0.099，根据标准曲线y=0.0056x-0.03，计算x=23.036，计算FHb含量得：

游离血红蛋白（FHb）含量（mg/L）=x×F=23.036 mg/L。

2. 取15µL马血清样本，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算：ΔA测定=A测定-A空白= 0.136-0.096=0.040，根据标准曲线y=0.0056x-0.03，计算x=12.5，计算FHb含量得：

游离血红蛋白（FHb）含量（mg/L）=x×F=12.5 mg/L。

参考文献：

[1] Reeder B, Svistune nko D, Cooper C, et al. The radical and redox chemistry of myoglobin and hemoglobin: from in vitro studies to human pathology [J]. Antioxid Redox Signal, 2004, 6(6): 954-966.

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