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产品型号：BC1955-100T/48S
更新时间：2024-04-19
厂商性质：生产厂家
访 问 量 ：914
010-50973130
产品分类
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土壤锰过氧化物酶（S-Mnp)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1955
规格：100T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体5mL×1瓶（自备） | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 液体10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂五 | 液体5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 试剂一：甲苯，需自备。
2. 试剂三：临用前加入3.5mL蒸馏水，用不完的试剂可在2-8℃保存3个月，禁止放置于-20℃。
产品说明：
锰过氧化物酶 (EC1.11.1.13) 是一种含铁血红素的过氧化物酶，其广泛存在于白腐担子真菌中，属于木质素降解酶系，是木质素起始降解的关键酶，能有效地降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物、叠氮化合物、DTT、多环方烃等，在农业废弃物处理、生物降解、生物漂白、染料脱色等领域有较多的研究和应用。
锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在465nm有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、震荡仪、甲苯、30-50目筛和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样自然风干或37℃风干，过30-50目筛。
二、测定步骤
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至465nm，分光光度计需用蒸馏水调零。
2、加样表（在EP管中依次加入下列试剂)：
试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
土样（g） | 0.08 | 0.08 |
试剂一（μL） | 40 | 40 |
充分震荡混匀，25℃准确水浴15min | ||
试剂二（μL） | 240 | 280 |
试剂三（μL） | 40 | - |
试剂四（μL） | 80 | 80 |
试剂五（μL） | 40 | 40 |
充分混匀，于30℃振荡反应3h，于11000g，4℃离心10min (如果尚未澄清，可取出上清后再次离心)，取200μL于微量比色皿/96孔板，测定465nm处吸光值，记为A测定管和A对照管，ΔA=A测定管-A对照管。注意：每个测定管均需设一个对照管。 | ||
三、S-Mnp活力的计算
a.用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下：
酶活性定义：每克土壤每小时氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
S-Mnp活性（U/g 土样）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷W÷T=12.121×ΔA÷W
ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.44×10-3L；W：样本质量，g；T：反应时间，3h；109：换算系数，1mol=109 nmol。
b.用96孔板测定的计算公式如下：
酶活性定义：每克土壤每小时氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
S-Mnp活性（U/g）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷W÷T=20.202×ΔA÷W
ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：96孔板光径，0.6cm；V反总：反应总体积，0.44×10-3L；W：样本质量，g；T：反应时间，3h。
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