植物根系活力（萘胺法）检测试剂盒 其它

植物根系活力检测试剂盒（萘胺法）说明书

可见分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC5290

规格：50T/48S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂三：临用前加入49.5 mL蒸馏水，充分混匀，现用现配。未用完的试剂2-8℃可以保存4周。

2、 标准品：0.2 mg/mL α-萘胺标准品。

产品说明：

根系是植物吸收水分和矿质营养的主要器官，同时又是植物体中如氨基酸、激素等重要物质合成、同化、转化的器官，因此根的生长情况和活动能力直接影响植物个体的生长情况、营养水平和产量水平，测定根系活力具有重要的实际意义。

植物根系能氧化吸附在根表面的α-萘胺，生成红色的α-羟基-1-萘胺，沉淀于有氧化力的根的表面，使这部分染成红色。α-萘胺在酸性条件下于对氨基苯磺酸钠和亚硝酸盐作用生成红色的偶氮染料。根系活力可以通过α-萘胺减少量来表示。

NO₂^-+Sodium P-aminobenzenesulfonate+α-Naphthylamine                       Azo Compounds（520nm）  

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、滤纸、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

样本的制备：将根部组织洗净，去除根上的泥土，轻轻擦干，不要过分挤压破坏根系细胞。称取0.5g于10mL EP 管中。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。

2、 标准品的稀释：将0.2mg/mL α-萘胺标准品用试剂一稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625、0mg/mL的标准品（0mg/mL记为标准空白管）。

3、 标准品稀释表：

备注：下述实验中每个标准管需400µL标准品（注意不要在此步骤直接检测标准品吸光值）。

4、在10mL EP管按下表步骤加样：

充分混匀，常温反应20min，取1mL于1mL玻璃比色皿中，测定在520nm处的吸光度，显色后需要在20min内完成检测。10min所对应的吸光值记作A1，3h10min所对应的吸光值记作A2。计算∆A测定=A1_测定-A2_测定，∆A空白=A1_空白-A2_空白，∆A =∆A测定-∆A空白，∆A标=A标准-A标准空白管。（标准曲线和空白管只需做1-2次）

三、根系活力计算

1. 标准曲线的绘制

根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标（y，ΔA标），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA（y，∆A）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）

2. 按照样本质量计算：以氧化的α-萘胺的量来表示根系活力

根系活力[ μg / (g·h) ]=x×V试剂二×10³÷(W×T)=1666.67×x÷W

10³：单位换算，1mg/mL=10³μg /mL；V试剂二：试剂二的体积，5mL；W：根系质量，g；T：反应时间，3h。

注意事项：

1、 在EP管内加入试剂三、试剂四以及样本的顺序不可改变。

2、 果∆A结果不在标准曲线范围内，可以减少样本质量（或者减少第一步反应时间）或者增加样本质量（或者增加第一步反应时间）。

3、 显色后需要在20min内完成检测

实验实例：

1、 称取0.5011g豆芽的根部，洗净，擦干，按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得计算∆A测定=A1_测定-A2_测定=1.182-1.06=0.122，∆A空白=A1_空白-A2_空白=1.217-1.175=0.042，∆A =∆A测定-∆A空白=0.122-0.042=0.080，标准曲线为y=4.7754x+0.0047，计算得x=0.016mg/mL,带入公式计算：

根系活力[ μg / (g·h) ] =1666.67×x÷W =53.216 μg / (g·h)

2、 称取0.5007g景天的根部，洗净，擦干，按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得计算∆测定=A1_测定-A2_测定=1.171-1.012=0.159，∆空白=A1_空白-A2_空白=1.217-1.175=0.042，∆A =∆A测定-∆A空白=0.159-0.042=0.117，标准曲线为y=4.7754x+0.0047，计算得x=0.023mg/mL,带入公式计算：

根系活力[ μg / (g·h) ] = 1666.67×x÷W =76.560 μg / (g·h)

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