维生素B12含量检测试剂盒

维生素 B12 含量检测试剂盒说明书

高效液相色谱法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号: BC4794
规格:50T/48S

产品简介：
维生素 B12（Vitamin B12）为 B 族维生素之一，是一类含钴的复杂有机化合物。人体内每天需
要量最少的一种，过量的维生素 B12 会产生毒副作用。
维生素 B12 在 210 nm 处存在紫外吸收，可利用紫外检测器测定其含量。
试验中所需的仪器和试剂：
高效液相色谱仪（Polaris C18-A 色谱柱（4.6×250 mm），紫外检测器（VWD））、台式离心
机、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管（1.5 mL）、针头式过滤器（水系）、注射器、抽滤器、
滤膜（水系、有机系）、棕色进样瓶、超纯水、甲醇（色谱纯）。

产品内容：
提取液：液体 30 mL ×1 瓶，4℃保存。本提取液中含有不溶物，需摇匀后使用。
试剂一：液体 5 mL ×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 1.5 mL ×1 瓶, 4℃保存。
试剂三：粉剂×2 瓶，4℃保存。
标准品：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 1 mL 蒸馏水配制成 5 mg/mL 维生素 B12 标准
溶液，4℃密封保存，避免阳光直射。

实验前准备工作：

1. 将 1 瓶试剂三溶解到 1000 mL 超纯水中，再加入 0.55 mL 的试剂二，混匀，得到流动相 A。
   2. 将 1000 mL 配制好的流动相 A、甲醇（色谱纯）用滤膜抽滤。（配制好的流动相 A 采用 0.22 µm
   水系滤膜抽滤，甲醇采用有机系滤膜抽滤）。
   3. 将抽滤好的流动相超声 20 min，除去气泡。
   4. 标准品的配制：将 5 mg/mL 的维生素 B12 标准溶液采用倍比稀释的方法分别用蒸馏水稀释成
   500μg/mL、100 μg/mL、20 μg/mL、4 μg/mL、0.8 μg/mL 的维生素 B12 标准溶液。（标准品浓度仅
   供参考，可根据实际样品浓度进行调整）。4℃避光保存（密封），测试前采用水系针头式过滤器
   过滤到棕色进样瓶内，待测

注意事项
1. 本试剂盒提取液中含有不溶物，需摇匀后使用。
2. 测试完毕后，需要用高浓度的超纯水相冲洗色谱柱（约 20-30 个柱体积），以防阻塞色谱柱，再
用高浓度的有机相冲洗色谱柱，最后按柱子的种类规范冲洗，防止损伤色谱柱。
3. 标准品的稀释倍数要根据样品中维生素 B12 的浓度确定，样品中维生素 B12 的峰面积必须在不
同浓度的标准品溶液的峰面积之内，该标准品的稀释倍数只是一个参考。若样本中维生素 B12 浓度
过高，建议用蒸馏水稀释后再测。
4. 若样本量过大，建议每天测试一次标准溶液（一个浓度的标准溶液即可），以确定相应的保留时
间，待测溶液测试前须放置至室温状态。
5. 为了排除梯度洗脱基线漂移的影响，可进行一次空白检测

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