血清淀*酶活性检测试剂盒 微量法

血清淀*酶（AMY）活性检测试剂盒（碘-淀粉比色法）说明书

微量法

货号：BC5055

规格：100T/48S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前加入12.5mL试剂二，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解；用不完的试剂2-8℃保存1个月。

2、 试剂三的配制：将试剂三A倒入试剂三B中，用蒸馏水定容至10mL，2-8℃避光保存一个月。

3、 标准品：10mg淀粉标准品。临用前加10mL试剂二，置于常温水中并加热至煮沸，配成1mg/mL淀粉标准液。用不完的试剂2-8℃保存1个月。

产品说明：

血清淀*酶( Serum amylase， AMY) 属于α-淀*酶，以无规则方式水解多糖分子内部的α-1,4糖苷键，生成寡聚糖、麦芽糖和葡萄糖的混合物。AMY主要由唾液腺和胰腺分泌，另外近端十二指肠、肺、子宫、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌。

AMY催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘可以与未被水解的淀粉结合，生成在570nm下有特征吸收峰的复合物，其深浅可计算出淀*酶的活力单位。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

酶标仪/可见分光光度计、恒温水浴锅/培养箱、台式离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取

取40μL血清和160μL蒸馏水混合（即将血清稀释5倍），分为2管100μL分别作为测定管和对照管。若实验后所测数值偏大或者偏小，可以调整稀释比例（比如数值偏小可以将80μL血清和120μL蒸馏水混合即将血清稀释2.5倍）

二、测定步骤和加样表

分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到570 nm，蒸馏水调零。

将淀粉标准液用蒸馏水稀释为0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的标准溶液。

按操作表依次加入各试剂：

混匀后吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中，于15min内读取测定管、对照管、空白管1、标准管、空白管2 在570nm下的吸光度，分别记为A测定、A对照、A空白1、A标准和A空白2，计算ΔA测定=（A空白1-A空白2）-（A测定-A对照），ΔA标准=A标准-A空白2。

三、AMY活性计算

1、 标准曲线的绘制

以ΔA标准为y轴，以标准溶液浓度为x轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b。将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。

2、按照血清体积计算：

单位定义：每mL血清每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活性单位。

AMY活性 (U/mL)= x×V样÷V样÷T×F =0.1×x×F

V样：加入反应体系中样本体积，0.1mL；T：反应时间，10min；F：稀释倍数。

注意事项：

1. ΔA测定大于1.5时，可以对样本进行适当稀释后测定。

2. 反应完成后需在15min内测定吸光度。

实验实例：

1、 取40μL牛血清和160μL蒸馏水混合（即血清稀释5倍）后，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定= A空白-（A测定-A对照）=（1.409-0.067）-（1.297-0.058）=0.103，带入标准曲线y=2.6047x-0.0165，计算x=0.0459，按公式计算活性：

AMY（U/mL）= x×V样÷V样÷T=0.1×x×F=0.1×x×F =0.0230 U/ mL。

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