酮体含量检测试剂盒 微量法

酮体含量检测试剂盒（血清、血浆、尿液等）说明书

微量法

货号：BC5065

规格：100T/96S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二A液：临用前取一支加入600μL蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃可保存3周。避免反复冻融。

2、 试剂二B液：临用前取一支加入300μL蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃可保存3周。避免反复冻融。

3、 试剂三：临用前取一支加入400μL蒸馏水（100T/96S），充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃保存3周。避免反复冻融。

4、 标准品1：8mg 3-羟基丁酸钠。临用前加入0.98mL蒸馏水，充分溶解，即8mg/mL 3-羟基丁酸钠标准溶液，2-8℃可以保存4周。临用前根据试验所需量用蒸馏水稀释成0.2mg/mL标准溶液待用，即为标准溶液1。

5、 标准品2：8mg乙酰乙酸锂。临用前加入0.95mL蒸馏水，充分溶解，即8mg/mL乙酰乙酸锂标准溶液，-20℃可以保存4周。临用前根据试验所需量用蒸馏水稀释成0.05mg/mL标准溶液待用，即标准溶液2。

6、 BOH工作液配制：临用前根据试验所需量将试剂一A液、试剂二A液 、试剂三按照850μL:40μL:10μL（共900μL，5T的量）的比例配成工作液，充分混匀，置于37℃保温15min（此步骤不可省略），现用现配，工作液在4h内用完。

7、 AcAc工作液配制：临用前根据试验所需量将试剂一B液、试剂二B液、试剂三按照870μL:20μL:10μL（共900μL，5T的量）的比例配成工作液，充分混匀，置于37℃保温15min（此步骤不可省略），现用现配，工作液在4h内用完。

产品说明：

酮体是肝脏脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸（AcAc）、β-羟丁酸（BOH）及丙酮三者统称。酮体中丙酮的生成量相当小，生成后即被吸收。乙酰乙酸和β-羟丁酸则经血流进入肝外组织，在那里被氧化，经柠檬酸循环提供更多能量给那些组织使用，例如骨、心肌和肾皮质。

在pH 7.0和37℃条件下，BOH在β-羟丁酸脱氢酶（HBDH）催化下脱氢生成乙酞乙酸，同时NAD⁺被还原成NADH；在pH 8.8和37℃条件下，AcAc被HBDH还原为3-羟基丁酸酯或脱羧生成丙酮，同时NADH被氧化成NAD⁺，NADH在340nm波长下有特征吸收峰，通过检测在340nm波长下的吸光值变化可以计算出BOH和AcAc的含量，从而计算出样本中酮体的含量。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/培养箱、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

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