品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | 货号 | BC2040 |
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规格 | 50管/24样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | β-淀粉酶活性测定 |
β-淀粉酶测试盒
货号:BC2040
规格:50管/24样
测试方法:可见分光光度法
测定意义:
淀粉酶负责水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
测定原理:
还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐热。根据上述特性,钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
操作步骤
一、 粗酶液提取:
称取约 0.1g 样本,加入 0.8mL 蒸馏水,研磨匀浆;将匀浆倒入离心管中,提取液在室温下放置提取 15min,每 5min 振荡 1 次,使其充分提取;6000g,常温离心 10min,取上清液加蒸馏水定容 10 mL,摇匀,即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液 1mL,加入 4mL 双蒸水,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于(α+β)淀粉
酶总活力的测定。
二、 测定步骤和操作表:
1、分光光度计或者酶标仪预热 30min 以上,调节波长 540nm。
2、将葡萄糖标准液稀释为 0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078 和 0.0039mg/mL 的标准溶液。
3、按操作表依次加入各试剂:
试剂名称
(μL)
α-淀粉酶活力测定 总淀粉酶活力测定 标准曲线的测定
对照管 测定管 对照管 测定管 标准管 空白管
淀粉酶原液 250 250 - - - -
蒸馏水 - - - - - 250
标准溶液 - - - - 250 -
70℃水浴 15min 左右,冷却
淀粉酶稀释液 - - 250 250 - -
试剂一 - - - -
试剂二 250 250
在 40℃恒温水浴中准确保温 5min
试剂一 500 500 500 500 500 500
试剂二 250 250 250 250
混匀,90℃水浴 10min,在 540nm 下测定吸光度,从左到右分别记为 A1、A2、A3、A4、A5
和 A6,计算 ΔA=A2-A1,ΔA 总=A4-A3,ΔA 标准=A6-A5。
三、 酶活性计算:
1、标准曲线的绘制
以 ΔA 标准为 y 轴,以标准溶液浓度为 x 轴,绘制标准曲线,得到方程 y=kx+b。将
ΔAα 测定带入方程得到 x 1 (mg/mL),ΔA 总代入方程得到 x 2 (mg/mL)。
2、α-淀粉酶活性
(1)按照样本质量计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=x 1 ×V 样÷(W×V 样÷V 样总)÷T =2×x 1 ÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=x 1 ×V 样÷(V 样×Cpr)÷T = 0.2×x 1 ÷Cpr
3、总淀粉酶活性计算
(1)按照样品质量计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
总淀 粉 酶 活 性 (mg/min//g 鲜 重 )=5×x 2 ×V 样÷(W×V 样 ÷V 样总) ÷T=10×x 2 ÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
总淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= 5×x 2 ×V 样÷(V 样×Cpr)÷T = x 2 ÷Cpr
4、β-淀粉酶活性计算
(1)按照样品质量计算
单位定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
β-淀粉酶活性(U/g 鲜重)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=(10×x 2 ÷W)-(2×x 1 ÷W)=(10×x 2 -2×x 1 )÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。β-淀粉酶活性(U/mg prot)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=(x 2 ÷Cpr)-(0.2×x 1 ÷Cpr)
5:总淀粉酶稀释倍数; V 样:加入反应体系中样本体积,0.25 mL;V 样总:提取液总体积,
10 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W :样本质量,g;T:反应时间,5min。
测定的吸光值大于 1 时,可以对样本进行适当稀释后测定。
β-淀粉酶测试盒订购说明:
1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。
4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。
β-淀粉酶测试盒运输说明:
1、极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
2、低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
3、常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。