超氧阴离子清除能力检测试剂盒 常量法

超氧阴离子清除能力检测试剂盒说明书

可见分光光度法

货号：BC1410

规格：50T/48S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前每瓶加6mL 蒸馏水充分溶解。2-8℃保存4周。

产品说明：

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏 作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。

AP-TEMED系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO₂^－，NO₂^－与对氨基 苯磺酰胺和α-萘 胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm 处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm的吸光值呈负相关。注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）︰提取液体积(mL)为1︰5~10的比例（建议称取约0.1 g组织，加入1 mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000 g，4℃，离心10 min，取上清，置于冰上待测。

2、液体：直接检测。若有浑浊则离心后取上清待测。

3、细胞样本：收集细胞到离心管内，弃上清，按照每500万细胞加入1mL提取液，超声波破碎细胞（功率200w，超声3s，间隔10s，重复30次），然后10000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30 min以上，调节波长至530 nm，蒸馏水调零。

2、 操作表（1.5mLEP管）：

三、超氧阴离子清除能力计算

超氧阴离子清除率（%）=（A空白-A测定）÷A空白×100%

注意事项：

1、样本制备好之后，立刻进行测定，请勿将样本进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。

实验实例：

1、 称取0.1 g黄杨叶片组织，加入1 mL提取液，冰浴匀浆，10000 g，4℃条件下离心10 min；取上清置于冰上待测。使用1 mL玻璃比色皿，按照测定步骤操作，计算A空白=0.666，A测定=0.157,按公式计算超氧阴离子清除率=（0.666-0.157）÷0.666×100%=76.4%

2、 吸取125μl的羊血清，使用1 mL玻璃比色皿，按照测定步骤操作，计算A空白=0.666，A测定=0.193,按公式计算活性超氧阴离子清除率=（0.666-0.185）÷0.666×100%=72.22%

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