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  • 嘌呤霉素 糖与碳水化合物
产品名称:

嘌呤霉素 糖与碳水化合物

产品品牌: 索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2021-01-05
嘌呤霉素 糖与碳水化合物
嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌,各种动物和昆虫细胞。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝CAS58-58-2
分子式C22H29N7O5·2HCl纯度≥99%
分子量544.44货号P8230
规格25mg供货周期现货
主要用途蛋白质合成抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

嘌呤霉素 糖与碳水化合物

有效期 4年

溶解性 50 mg/mL in water

别名 二盐酸嘌呤霉素;嘌呤霉素盐酸盐

英文名称 Puromycin

CAS 58-58-2

分子式 C22H29N7O5·2HCl

分子量 544.44

储存条件 -20℃

危险代码 R:22

纯度 PURITY: ≥99%

外观(性状) 白色粉末

单位 支

说明:蛋白质合成抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。

嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌,各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物,能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后,不会参与随后的任何反应,从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

 

嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC),赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。

嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关,现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下,嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

溶解性:溶于水,参考浓度50mg/ml。

使用方法:

1.建议使用浓度

哺乳动物细胞:1-10 μg/mL,浓度需要杀灭曲线来确定;

大肠杆菌:LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌,使用浓度为125μg/mL。注:使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要的pH值调节,而且受宿主细胞本身的影响。

2.溶解方法

用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液,经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存;也可溶于甲醇,配制成10 mg/ml的储存液。

3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定(以shRNA转染或者慢病毒转导为例)

嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株,确定杀死未转染/转导细胞的低浓度嘌呤霉素关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线(kill curve)。

1) Day 1:24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜;

2) Day 2:准备筛选培养基:含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15μg/mL,少5个梯度);b)往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基;之后37℃孵育细胞;

3) Day 4:更换新鲜的筛选培养基,并观察细胞存活率。

4) 根据细胞的生长状态,约2-3天更换新鲜的筛选培养基;

5) 每日监测细胞,观察存活细胞率,从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物低浓度。

4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选

等转染含有pac基因的质粒后,细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖,以筛选出稳定转染子。

1)细胞转染48h后,将细胞(原样或稀释)置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。

注意:当细胞处于分裂活跃期时,抗生素作用。细胞过于密集,抗生素产生的效力会明显下降。进行细胞分盘使其密度不超过25%。

2)每隔2-3天,移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。

3)筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间,这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。注意:每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选少需要48h,有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。

4)转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中,用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。

注意事项

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2)嘌呤霉素为有毒化合物,操作时请小心拿放。

 

参考文献:

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《Panaxadiol inhibits synaptic dysfunction in Alzheimer's disease and targets the Fyn protein in APP/PS1 mice and APP-SH-SY5Y cells》 作者:Xicai Liang,Yingjia Yao,YingLin Liang,KongHong he,XiaoYue Shi,Jingxian Yang 期刊:Life Sciences 影响因子:3.448 PMID:30735733

《Prognostic implications and oncogenic roles of MYBL2 protein expression in esophageal squamous-cell carcinoma》 作者:Hui Qin,Yunyun Li, Hongyan Zhang,Feng Wang, Hongliu He, Xue Bai,and Shanshan Li 期刊:OncoTargets and Therapy 影响因子:3.046 PMID:30881043

《Establishment of an immortalized intestinal epithelial cell line from tree shrews by lentivirus-mediated hTERT gene transduction》 作者:Bowen Yin,Qingkai Song,Lingxia Chen,Xiaofei Li,Yuanyuan Han,Xuan Wang,Jiejie Dai,Xiaomei Sun 期刊:Cytotechnology 影响因子:1.672 PMID:30603916

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