单胺氧化酶活性检测试剂盒 微量法

单胺氧化酶（MAO）活性检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0015

规格：100T/96S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

产品说明：

MAO（EC1.4.3.4）包括MAO-A和MAO-B，是一种结合在线粒体外膜上的黄素蛋白，可催化神经递质和生物胺氧化脱氨。单胺氧化酶与机体老化有关，被认为是衰老的标志，其主要存在于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢，含量较低，具有重要的生理功能。

MAO催化单胺类底物脱氨生成相应的醛，进一步氧化成酸，底物在360nm处有特征吸收峰，通过测定360nm处光吸收下降的速率，可计算MAO活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱中、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、震荡仪、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、 临用前根据实验用量取出部分提取液一、提取液二和试剂一置于4℃预冷30min。

2、 组织样本：按照样本质量（g）：提取液一体积（mL）为1:5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆；1000g 4℃离心10min，取上清，将上清液转移至预冷的离心管，于10000g，4℃离心30min。弃上清，沉淀中加入1mL预冷的提取液二，振荡混匀，于16000g，4℃离心40min，弃上清，加入1mL试剂一，振荡混匀，置冰上待测。

3、 细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液一体积（mL）为 500~1000:1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液一）加入提取液一，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔7s，总时间3min），1000g，4℃离心10min，取上清，将上清液转移至预冷的离心管，于10000g，4℃离心30min。弃上清，沉淀中加入1mL预冷的提取液二，振荡混匀，于16000g，4℃离心40min，弃上清，沉淀中加入1mL试剂一，振荡混匀，置冰上待测。

4、 血清（浆）或液体样本：直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。

二、测定步骤

1、紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至360nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、加样表（在微量石英比色皿/96孔UV板中依次加入下列试剂)：

三、MAO活力的计算

a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1、按样本蛋白质浓度计算

酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol底物的酶量定义为一个酶活单位。

MAO活性（U/mg prot）= ΔA÷ɛ÷d×V反总×10⁹÷(V样×Cpr)÷T=57.08×ΔA÷Cpr

2、按样本质量计算

酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每mg组织每分钟消耗1nmol底物定义的酶量为一个酶活单位。

MAO活性（U /g 质量）= ΔA÷ɛ÷d×V反总×10⁹÷(V样÷V样总×W)÷T=57.08×ΔA÷W

3、按细菌/细胞数量计算

酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每10⁴细菌/细胞每分钟消耗1nmol底物的酶量定义为一个酶活单位。

MAO活性（U /10⁴ cell）= ΔA÷ɛ÷d×V反总×10⁹÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T=57.08×ΔA÷细胞数量

4、 按照样本体积计算

酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每mL血清或液体样本每分钟消耗1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。

MAO 活性（U /mL）=ΔA÷ɛ÷d ×V反总×10⁹÷V样÷T= 57.08×ΔA

ε：底物摩尔消光系数：1460L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.0002L；V样：加入样本体积，0.02mL，V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，120min；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol。

b．用96孔UV板测定的计算公式如下：

1、按样本蛋白质浓度计算

酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol底物的酶量定义为一个酶活单位。

MAO活性（U /mg prot）= ΔA÷ɛ÷d×V反总×10⁹÷(V样×Cpr)÷T= 95.13×ΔA÷Cpr

2、按样本质量计算

酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每g组织每分钟消耗1nmol底物的酶量定义为一个酶活单位。

MAO活性（U /g 质量）= ΔA÷ɛ÷d×V反总×10⁹÷(V样÷V样总×W)÷T= 95.13×ΔA÷W

3、按细菌/细胞数量计算

酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每10⁴细菌/细胞每分钟消耗1nmol底物的酶量定义为一个酶活单位。

MAO活性（U /10⁴ cell）= ΔA÷ɛ÷d×V反总×10⁹÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T= 95.13×ΔA÷细胞数量

4、 按照样本体积计算

酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每mL血清或液体样本每分钟消耗1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。

MAO 活性（U/mL）=ΔA÷ɛ÷d ×V反总×10⁹÷V样÷T = 95.13×ΔA

ε：底物摩尔消光系数：1460L/mol/cm；d：96孔UV板光径，0.6cm；V反总：反应总体积，0.0002L；V样：加入样本体积，0.02mL，V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，120min；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol。

参考文献：

[1] Bolea I, Gella A, Unzeta M. Propargylamine-derived multitarget-directed ligands: fighting Alzheimer's disease with monoamine oxidase inhibitors[J]. J Neural Transm. 2013, 120(6):893-902.

[2] Schmidt K, Li Z, Schubert B, et al. Screening of entomopathogenic Deuteromycetes for activities on targets involved in degenerative diseases of the central nervous system[J]. Journal of Ethnopharmacology. 2003, 89(2-3):251-260.

相关系列产品：

BC1090/BC1095 黄*呤氧化酶（XOD）活性检测试剂盒

BC1280/BC1285 二胺氧化酶（DAO）活性检测试剂盒

单胺氧化酶活性检测试剂盒 微量法 单胺氧化酶活性检测试剂盒 微量法