品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | 货号 | BC2580 |
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规格 | 50管/24样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | β-半乳糖苷酶(β-GAL)测试 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,石油 |
β-半乳糖苷酶(β-GAL)测试盒 糖代谢
货号:BC2580
规格:50管/24样
测试方法:可见分光光度法
测定意义:
β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解,此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量,还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解,释放自由的半乳糖。
测定原理:
β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。
自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
产品内容:
提取液:液体50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入5mL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二:液体15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体80mL×1 瓶,4℃保存。
标准液:液体1ml×1支,4℃保存,10μmol/ml对硝基苯酚溶液。
操作步骤:
一、 粗酶液提取:
1、 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30 次);15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
标准液的处理:用试剂二将标准液稀释200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/ml
二、 测定步骤:
1、 分光光度计预热30min 以上,调节波长400nm,蒸馏水调零。
样本测定(在EP 管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 |
试剂一 | 200 |
|
|
蒸馏水 |
| 200 |
|
试剂二 | 250 | 250 |
|
样本 | 50 | 50 |
|
迅速混匀,放入37℃准确水浴30min | |||
标准液 |
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| 500 |
试剂三 | 1000 | 1000 | 1000 |
充分混匀,400nm 处测定吸光值A,计算ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。
三、 β-GAL 活性计算:
根据标准管的吸光度(x)和浓度(y,nmol/ml)建立标准曲线,将△A带入标准曲线中,计算样品生成的产物量(nmol/ml)。
(1) 按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg 组织蛋白每小时产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/h /mg prot)=(y×V 反总)÷(V 样×Cpr)÷T
=20×y÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每g 组织每小时产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/h /g 鲜重)=(y×V 反总)÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=20×y ÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1 万个细菌或细胞每小时产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/h /104 cell)= (y×V 反总)÷(500×V 样÷V 样总)÷T
=0.04×y
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;V 反总:反应体系总体积,0.5mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数,500 万;T:反应时间,0.5h。
相关文献:
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