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产品名称:

β-1,3葡聚糖酶活性检测 糖代谢

产品品牌: 索莱宝 价格: 650
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-05
β-1,3葡聚糖酶活性检测 糖代谢
β-1,3-GA水解昆布多糖,内切β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0360
规格50管/24样供货周期现货
主要用途β-1,3葡聚糖酶含量测定应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

β-1,3葡聚糖酶活性检测 糖代谢
货号:BC0360
规格:50管/24样 
测试方法:可见分光光度法

产品内容:

提取液:液体50mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入3mL 蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存;

试剂二:液体42mL×1 瓶,4℃保存;

标准品:粉剂×1支,4℃保存,含10mg无水葡萄糖(干燥失重<0.2%),临用前加入1ml蒸馏水溶解,配制成10mg/ml葡萄糖溶液备用,4℃可保存1周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间

标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

产品说明:

β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下,可诱导细胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。

β-1,3-GA 水解昆布多糖,内切β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率,来计算其酶活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸

馏水。

操作步骤:

粗酶液提取:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL

提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

  • 分光光度计预热30min 以上,调节波长540nm,蒸馏水调零。
  • 样本测定(在1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL)

测定管

对照管

标准管(葡萄糖溶液)

样本或标准液

100

100

100

蒸馏水

 

100

100

试剂一

100

 

 

充分混匀,放入37℃水浴60min。

试剂二

600

600

600

充分混匀,沸水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却,540nm 处记录各管吸光值A,

如果吸光值大于2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式乘以相应稀释倍数),ΔA=A 测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

β-1,3-GA 活性计算:

根据标准管吸光度(x)和浓度(y,mg/ml)建立标准曲线,将ΔA带入公式中计算出样品中产生的还原糖的含量y值(mg/ml)

  • 按蛋白浓度计算

单位的定义:每mg 组织蛋白每小时产生1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。

β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr

  • 按样本鲜重计算

单位的定义:每g 组织每小时产生1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。

β-1,3-GA(U /g 鲜重)=(V1)÷(W×V1÷V2)=y ÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细胞或细菌每小时产生1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。

β-1,3-GA(U /g 鲜重)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y

V1:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

 相关文献:

 《The antifungal activity of a thaumatin-like protein from oyster Crassostrea gigas》 作者:X Niu,Q Xu,W Wang,Z Yu,Z Liu,C Qu,Y Liu,C Gong,L Wang,L Song 期刊:Invertebrate Survival Journal 影响因子:0.967 PMID:

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