土壤系列土壤多酚氧化酶（PPO）测试盒
货号：BC0110
规格：50管/48样
测试方法：微量法
S-PPO主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放，催化土壤中芳香族化合物氧化成醌，醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，用于土壤环境修复。

产品型号：BC0110

更新时间：2024-07-09

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生化检测试剂盒-常量法

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产品介绍

土壤多酚氧化酶（S-PPO）活性检测试剂盒说明书详见附件
可见分光光度法
货号: BC0110
规格: 50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	粉剂×2瓶	2-8℃保存
试剂二	液体10 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂三	液体 100 mL×1瓶（自备）	2-8℃保存
标准液	液体10 mL×1瓶	2-8℃保存

产品说明：
S-PPO主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放，催化土壤中芳香族化合物氧化成醌，醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，用于土壤环境修复。
S-PPO能够催化邻苯三酚产生紫色没食子素，后者在430nm有特征光吸收。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

测定步骤
1、可见分光光度计预热30min以上，调节波长至430nm，试剂三调零。
2、标准液稀释：用0.5mol/L HCl溶液将标准液稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0 mg/mL。试验中需标准品1000µL。
3、标准液稀释表：

序号	稀释前浓度（mg/mL）	标准液体积（µL）	0.5mol/L HCl体积（µL）	稀释后浓度（mg/mL）
1	0.2	1000	0	0.2

2	0.2	1000	1000	0.1
3	0.1	1000	1000	0.05
4	0.05	1000	1000	0.025
5	0.025	1000	1000	0.0125
6	0.0125	1000	1000	0.00625
7	0.00625	1000	1000	0.003125
8	-	0	1000	0

备注：实验中每个标准管需要1mL标准溶液。
4、标准曲线的建立：以0 mg/mL标准液调零，取1mL稀释好的标准液于1mL玻璃比色皿中在430nm处测定吸光值A，根据吸光度（x）和浓度（y，mg/mL）做出标准曲线。
5、操作表：

试剂名称	测定管
风干土样（g）	0.05
试剂一（μL）	500
振荡混匀，30℃水浴反应1h
试剂二（μL）	200
试剂三（μL）	1750

振荡数次，室温静置30min，取1mL上层液于1mL玻璃比色皿中，430nm处测定吸光值A。

S-PPO活性计算
根据标准曲线，将样本吸光值A（x）带入公式中，计算出样本浓度y（mg/mL）。
单位的定义：每天每g土样中产生1mg紫色没食子素定义为一个酶活力单位。
S-PPO活性（U/g 土样）=y×V提取相÷W÷T=840×y
T：反应时间，1h=1/24d；V提取相：1.75mL；W：样本质量，0.05g。
相关发表文献：

B Li,Y Ding, X Tang,et al. MTA1 promotes the invasion and migration of pancreatic cancer cells potentially through the HIF-α/VEGF pathway. Journal of Receptor and Signal Transduction Research. August 2018;(IF2.998)

参考文献：
[1] Montgomery M W, Sgarbieri V C. Isoenzymes of banana polyphenol oxidase[J]. Phytochemistry, 1975, 14(5-6): 1245-1249.
[2] Dogan S, Dogan M. Determination of kinetic properties of polyphenol oxidase from Thymus (Thymus longicaulis subsp. chaubardii var. chaubardii)[J]. Food chemistry, 2004, 88(1): 69-77.
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