乙酰*碱酯酶(AchE)活性检测试剂盒 微量法

乙醇酸氧化酶（GO）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC2015
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前加入2.5 mL双蒸水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

产品说明：
乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.15）是乙醇酸循环中的一种酶，也是植物光呼吸代谢中的关键酶，催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，通过测定乙醇酸氧化酶活性，可以了解植物光合和呼吸代谢的基本方法。
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和盐酸苯 肼反应生成乙醛酸苯腙，在324nm有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板UV板、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清置冰上待测。
细胞或细菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、测定步骤

1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至324nm，紫外分光光度计蒸馏水调零。

2. 将试剂一25℃预热15min。

3. 样本测定：在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂：

注意事项：

1. 测定之前进行预实验，若吸光值A1>1，请将样本用提取液进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2. 色素含量较高的样本，可在提取酶时加活性炭吸附。

3. 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，其OD值变化不超过0.02。

实验实例：

1. 称取约0.1g三叶草组织，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清进行检测，使用微量石英比色皿测得ΔA测定管=A2测定-A1测定=0.8956-0.7839=0.1117，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0853-0.077=0.0083，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.1117-0.0083=0.1034，按样本质量计算酶活得：GO酶活（U/g 质量）=392.16×ΔA÷W=405.4934 U/g 质量。

2. 称取约0.1g菠菜组织，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清稀释2倍进行检测，使用微量石英比色皿测得ΔA测定管=A2测定-A1测定=0.9286-0.8105=0.1181，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0853-0.077=0.0083，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.1181-0.0083=0.1098，按样本质量计算酶活得：GO酶活（U/g 质量）=392.16×ΔA÷W×2（稀释倍数）=861.1834 U/g 质量。

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