氨基酸（AA）含量检测试剂盒

氨基酸（AA）含量检测试剂盒 

氨基酸（AA）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号: BC1570
规格: 50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂三：临用前加入2 mL无水乙醇充分溶解，再加入28 mL蒸馏水混匀，2-8℃避光保存4 周；

2. 试剂四：临用前加入3 mL蒸馏水，充分溶解，可以2-8℃保存4周；

3. 标准品：10 μmol/mL 谷*酸标准液；

4. 配制1.25 μmol/mL谷*酸标准溶液：临用前取100μL 10 μmol/mL谷*酸标准溶液，加入700 μL蒸馏水，充分混匀，得到1.25 μmol/mL谷*酸标准溶液，现用现配。

产品说明：
动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。另外，氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。
氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在570nm有特征吸收峰；通过测定570nm吸光度，来计算氨基酸含量。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、无水乙醇（99%AR）、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

实验实例：

1. 取0.1045g合欢叶片组织加入1mL试剂一进行样本处理，取上清稀释2倍后按照测定步骤操作，使用1mL玻璃比色皿测得ΔA测定管=A测定管-A空白管=0.5457-0.1172=0.4285，ΔA标准管=A标准管-A空白管=1.0790-0.1172=0.9618，按样本质量计算含量得：

氨基酸含量（μmol/g质量）=1.25×ΔA测定管÷ΔA标准管÷W×F =10.658 μmol/g 质量。

1. 取0.1051g大鼠肝脏组织加入1mL试剂一进行样本处理，取上清稀释6倍后按照测定步骤操作，使用1mL玻璃比色皿测得ΔA测定管=A测定管-A空白管=1.0535-0.1172=0.9363，ΔA标准管=A标准管-A空白管=1.0790-0.1172=0.9618，按样本质量计算含量得：

氨基酸含量（μmol/g质量）=1.25×ΔA测定管÷ΔA标准管÷W×F =69.469 μmol/g 质量。

1. 取0.5mL马血清加入0.5mL试剂一进行样本处理，取上清稀释4倍后按照测定步骤操作，使用1mL玻璃比色皿测得ΔA测定管=A测定管-A空白管=0.8865-0.1172=0.7693，ΔA标准管=A标准管-A空白管=1.0790-0.1172= 0.9618，按样本体积计算含量得：

氨基酸含量（μmol/mL）=2.5×ΔA测定管÷ΔA标准管×F =7.999 μmol/mL。
相关发表文献：

1. Li Z, Wang R, Gao Y, et al. The Arabidopsis CPSF30‐L gene plays an essential role in nitrate signaling and regulates the nitrate transceptor gene NRT 1.1[J]. New Phytologist, 2017, 216(4): 1205-1222.

2. Wang C, Zhang W, Li Z, et al. FIP1 plays an important role in nitrate signaling and regulates CIPK8 and CIPK23 expression in Arabidopsis[J]. Frontiers in plant science, 2018, 9: 593.

3. Wang N, Zhang X, Wang S, et al. Structural characterisation and immunomodulatory activity of polysaccharides from white asparagus skin[J]. Carbohydrate polymers, 2020, 227: 115314.

参考文献：

1. Lee S W, Lim J M, Bhoo S H, et al. Colorimetric determination of amino acids using genipin from Gardenia jasminoides[J]. Analytica chimica acta, 2003, 480(2): 267-274.

2. Kalant H. Colorimetric Ninhydrin Reaction for Measurement of α-Amino Nitrogen[J]. Analytical Chemistry, 1956, 28(2): 265-266.

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