糖原D-PAS染色液（淀粉酶消化法）

糖原D-PAS染色液(淀粉酶消化法)

货号：G1282

规格：5×50ml/5×100ml

     糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus在1946年先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色液不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质，以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。 
     过碘酸（又称高碘酸）是一种强氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的1，2-乙二醇基，使之变为二醛，醛与Schiff试剂能结合成一种品红化合物，产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质，使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间，使氧化控制在即能把乙二醇基氧化成醛基，又不于过氧化，这是很关键的步骤。 
     PAS技术是*可检测不同种类的黏液物质（如糖原、黏蛋白和糖蛋白）的方法，但PAS技术却不能区别黏蛋白和糖原。若要准确鉴别黏液物质（如黏蛋白和糖原），需加入糖原消化步骤。大多数情况下可用α-淀粉酶或麦芽淀粉酶来催化糖原的糖苷键水解。形成水溶性的双糖-麦芽糖，在应用PAS技术之前将糖原从组织切片上除去。人类的唾液被认为是消化糖原的一种有效手段，但是出于安全以及缺乏标准唾液的考虑，不主张应用唾液。
     糖原D-PAS染色液的特点在于糖原PAS染色之前经淀粉酶处理，糖原消化时需要两张相同的切片，脱蜡后一张切片用含有淀粉酶的适当缓冲液处理，另一张仅用缓冲液处理。然后两张切片均用PAS法染色，消化后染色消失表明存在糖原。

产品说明：
糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus 在 1946 年使用 PAS 技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色液不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质，以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。氧化剂能氧化糖类及有关物质中的 1，2-乙二醇基，使之变为二醛，醛与 Schiff 试剂能结合成一种品红化合物，产生紫红色。由于氧化剂还可氧化细胞内其他物质，使用时应注意选择好氧化剂浓度和氧化时间，使氧化控制在即能把乙二醇基氧化成醛基，又不于过氧化，这是很关键的步骤。PAS 技术是可检测不同种类的黏液物质（如糖原、黏蛋白和糖蛋白）的方法，但 PAS 技术却不能区别黏蛋白和糖原。若要准确鉴别黏液物质（如黏蛋白和糖原），需加入糖原消化步骤。大多数情况下可用α-淀粉酶或麦芽淀粉酶来催化糖原的糖苷键水解。形成水溶性的双糖-麦芽糖，在应用 PAS 技术之前将糖原从组织切片上除去。人类的唾液被认为是消化糖原的一种有效手段，但是出于安全以及缺乏标准唾液的考虑，不主张应用唾液。糖原 D-PAS 染色液的特点在于糖原 PAS 染色之前经淀粉酶处理，糖原消化时需要两张相同的切片，脱蜡后一张切片用含有淀粉酶的适当缓冲液处理，另一张仅用缓冲液处理。然后两张切片均用 PAS 法染色，消化后染色消失表明存在糖原。

操作步骤（仅供参考）：
1、两张相同切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇入水。
2、一张切片入淀粉酶溶液处理 20min。另一张不用淀粉酶溶液处理，入水 1h 作为对照。
3、流水冲洗两张切片各 5～10min。
4、入氧化剂中，室温（25-30℃）放置 5～8min，一般不宜超过 10min。
5、自来水冲洗 1 次，再用蒸馏水浸洗 2 次。
6、入 Schiff Reagent，置于室温（25-30℃）阴暗处，浸染 10～20min。
7、自来水冲洗 10min。
8、入 Mayer 苏木素染色液中，染细胞核 1～2min。
9、(可选)酸性分化液分化 2～5s。
10、自来水冲洗 10～15min 后，更换双蒸水清洗，使其返蓝。
11、 二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：
糖原、中性、唾液黏蛋白 红紫色
各种糖蛋白 红紫色
细胞核 蓝色
未处理的切片，糖原呈亮红色或红紫色；淀粉酶处理的切片，糖原阴性。

注意事项：
1、 切片脱蜡应尽量干净，否则影响染色效果。
2、 需使用一张阳性对照片验证酶的活性。
3、 氧化剂氧化时间不宜过久，氧化时的温度以 18～22℃。
4、 试剂 A、试剂 B、试剂 C 应置于 4℃密闭保存，使用时避免接触过多的阳光和空气。使用前，提前取出恢复到室温，避光暗处使用。
5、 酸性分化液应经常更换新液，其分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和酸性分化液的新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够。
6、 在氧化剂和 Schiff Reagent 中作用时间非常重要，该依据切片厚薄、组织的类别等决定。
7、 冷冻切片染色时间尽量要短。
8、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关文献：

《Liraglutide reduces hepatic glucolipotoxicity?induced liver cell apoptosis through NRF2 signaling in Zucker diabetic fatty rats》 作者:Jun Guo，Cai Li，Chunxiao Yang，Bing Li，Jie Wei，Yajun Lin，Peng Ye，Gang Hu，Jian Li 期刊:Molecular Medicine Reports 影响因子:1.851 PMID:29693190

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