抗酒石酸酸性磷酸酶染色液

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液

产品说明：
酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜 pH 为 4.5～5.5。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液。血液中的 TRAP 绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的 TRAP 了解破骨细胞的功能状态。

以萘酚 AS-BI 为底物，在酸性 pH 下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的 ACP 有抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片，亦可用于冰冻切片、石蜡切片。
自备材料：
1、 蒸馏水、恒温箱
2、 载玻片、推玻片
3、 光学显微镜
操作步骤(仅供参考)：
(一)血液、细胞涂片：
1、 推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，推玻片于载玻片保持 30 度，置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动铺满血膜为止。
2、 自然晾干，TRAP 固定液 4℃固定 30s～3min，多数情况下 30～60s 即可。
3、 水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
4、 切片入 TRAP 孵育液，置于 37℃温箱，避光浸染 45～60min，水洗。
5、 复染：苏木素染色液染色 5min 或甲基绿染色液染色 2～3min。
6、 水洗、晾干、镜检。
(二)冰冻切片：
1、 冰冻切片回温 37℃，水中浸泡 1～2min。
2、 自然晾干，TRAP 固定液 4℃固定 1～3min。
3、 水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
4、 切片入 TRAP 孵育液，置于 37℃温箱，避光浸染 45～60min，水洗。
5、 复染：苏木素染色液染色 5～8min 或甲基绿染色液染色 2～3min。
6、 水洗、晾干、镜检。
(三)石蜡切片：
1、 石蜡切片脱蜡 5～10min，重复一次。
2、 无水乙醇 5min，90%乙醇和 70%乙醇各 2min。
3、 水洗 2min。
4、 自然晾干，TRAP 固定液 4℃固定 30s～3min，多数情况下 30～60s 即可。
5、 水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
6、 切片入 TRAP 孵育液，置于 37℃温箱，浸染 45～60min，水洗。
7、 复染：苏木素染色液染色 5～8min 或甲基绿染色液染色 2～3min。
8、 水洗、晾干、镜检。
染色结果：
阳性颗粒 紫红色
细胞核 蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)

临床意义：
1、 毛细胞白血病的毛细胞 ACP 染色呈强阳性或中度阳性，且不被酒石酸抑制，其他细胞均呈阴性或极弱阳性。
2、 急性白血病幼单核细胞 ACP 染色呈阳性，原淋巴细胞呈弱阳性，原粒细胞对 ACP 反应不一。
3、 T 淋巴细胞 ACP 染色呈阳性，颗粒粗大、分布密集。B 淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的弱阳性。
4、 戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。

注意事项：
1、 TRAP 孵育液易失效，本法宜用皮肤穿刺血涂片，晾干后应及时染色
2、 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
3、 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
4、 组织固定需在 4℃冰箱进行，时间不宜超过 24h，否则酶活性会减弱或消失。
5、 组织在石蜡包埋时，温度不宜高于 56℃。应使用熔点为 52～54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。
6、 不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用 AR 级以上的二甲苯。
7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液