土壤酸性转化酶（S-AI）活性检测试剂盒

土壤酸性转化酶（S-AI）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC3070
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取1瓶加入15 mL试剂一充分溶解备用，用不完的试剂2-8℃保存2周；

2. 标准品：10 mg无水葡*糖。临用前加入1 mL试剂一充分溶解，制备10 mg/mL葡萄糖标准溶液待用，2-8℃保存两周。

产品说明：
S-AI在pH为4.5~5.0（酸性）条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。S-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与S- AI活性成正比。




注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、恒温培养箱/水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水、30-50目筛、甲苯（不允许快递）。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可参考文献）
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。
二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2. 标准液的稀释：将10mg/mL葡萄糖标准液用试剂一稀释至0.2、0.15、0.1、0.08、0.06mg/mL的葡萄糖标准液备用。

3. 标准液稀释表

备注：试验中每个标准管需标准品800µL。

1. 样本测定：

混匀，煮沸10min左右（盖紧，以防止水分流失），流水冷却后，540nm处蒸馏水调零，记录各管吸光值A，记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测1-2次。
三、S-AI活性计算

1. 标准曲线的绘制：

根据葡萄糖标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。

1. S-AI活性计算

单位定义：37℃每g土壤每天产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI（U/g 土样）=x×V÷W÷T=19.2×x÷W
V：加入的标准液体积，0.8mL；W：样本质量，g；T：反应时间：1/24d。
注意事项：
1、如果加入试剂三，煮沸10min后有混浊物出现，建议离心除去沉淀（10000rpm，2min），取上清测定吸光度；
2、如果吸光值大于1，可以将上清液再进行稀释；若吸光值较小，可以减少上清液稀释倍数。两种操作均要注意改变公式中的稀释倍数。
实验实例：

1. 取两管0.1g林土，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为A测定管、A对照管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.425-0.054=0.371，标准曲线：y=6.0331x-0.3103，x=0.113，计算酶活得：S-AI（U/g 土样）=19.2×x÷W=19.2×0.113÷0.1=21.696 U/g 土样。

2. 取两管0.1g林土，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为A测定管、A对照管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.410-0.055=0.355，标准曲线：y=6.0331x-0.3103，x=0.110，计算酶活得：

S-AI（U/g 土样）=19.2×x÷W=19.2×0.110÷0.1=21.12 U/g 土样。
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