土壤蔗糖酶检测试剂盒 可见分光光度法

土壤蔗糖酶( S-SC）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0240

规格：50T/24S  土壤蔗糖酶检测试剂盒 可见分光光度法  土壤蔗糖酶检测试剂盒 可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：自备甲苯；

2、 试剂三：临用前取1瓶加入15 mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂2-8℃保存2周；

3、 标准品：临用前加入1 mL蒸馏水溶解备用，2-8℃可保存2周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。

产品简介：

S-SC能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收，其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度密切关，是评价土壤肥力的重要指标。

S-SC催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与S-SC活性成正比。

Sucrose              Reducing Sugare             3-Amino-5-Nitrosalicylic Acid (540nm)

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、30-50目筛、冰、研钵、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，研磨，过30-50目筛。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2. 标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 mg/mL，可参考下表。

备注：实验中每个标准管需200µL标准溶液。

3. 加样表：

充分混匀，放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，缠封口膜以防止水分散失），流水冷却后充分混匀。

540nm处蒸馏水调零，取全部反应液于1mL玻璃比色皿中，读取吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管（每个测定管需设一个对照管），ΔA标准=A标准管-A空白管。标准曲线和空白管只需测1-2次。

三、S-SC活性计算

1、标准曲线的建立：

根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。

2、S-SC活性计算：

单位的定义：37℃，每天每g土样中产生1mg还原糖定义为一个S-SC活力单位。

S-SC活力(U/g 土样)= x ×10×V反总÷W÷T=101.5x

10：稀释倍数；T：反应时间，1d；V反总：反应体系总体积，1.015mL；W：样本质量，0.1g。

相关发表文献：

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参考文献：

[1] Gao M, Song W, Zhou Q, et al. Interactive effect of oxytetracycline and lead on soil enzymatic activity and microbial biomass[J]. Environmental toxicology and pharmacology, 2013, 36(2): 667-674.

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