品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | 货号 | BC1285 |
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规格 | 100管/48样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 二胺氧化酶活性测定 |
二胺氧化酶测试盒 微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC1285
规格:100T/48S
产品内容:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 0.25mL×1 支,4℃保存。
试剂二:液体 2mL×1 管,4℃保存。
试剂三:液体 1mL×1 管,4℃保存。
产品说明:
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻
联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺,在460nm处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算DAO活性。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心20min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
二、测定操作表:
1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长460nm,蒸馏水调零。
2、操作表
| 对照管 | 测定管 |
粗酶液(μL) | 50 | 50 |
提取液(μL) | 128 | 108 |
试剂一(μL) | 2 | 2 |
试剂二(μL) | 20 | 20 |
试剂三(μL) |
| 20 |
混匀,37℃水浴30min,微量石英比色皿/96孔板,蒸馏水调零,测定460nm吸光值。ΔA=A测定-A 对照 |
三、酶活性计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算:
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量为一个酶活力单位(U)。
DAO 活性(nmol/min/mg prot)=A460÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 18×A 460 ÷Cpr
(2)按样本质量计算:
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每克组织每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性(nmol/min/g)=A460÷(ε×d)×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T= 18×A 460 ÷W
(3)按细胞数量计算:
酶活性定义: 在pH7.2,温度为37℃条件下,每104个细胞每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性(nmol/min/104cell)=A460÷(ε×d)×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T= 18×A460 ÷细胞数量
(4) 按液体体积计算
酶活性定义: 在pH7.2,温度为37℃条件下,每毫升血清每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性(nmol/min/mL)=A460÷(ε×d)×V 反总÷V 样÷T= 18×A460
ε:氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数:7.5 L/mmol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:
样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算:
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量为一个酶活力单位(U)。
DAO 活性(nmol/min/mg prot)=A460÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 36×A 460 ÷Cpr
(2)按样本质量计算:
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每克组织每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性(nmol/min/g)=A460÷(ε×d)×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T= 36×A460÷W
(3)按细胞数量计算:
酶活性定义: 在pH7.2,温度为37℃条件下,每104个细胞每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性(nmol/min/104cell)=A460÷(ε×d)×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T = 36×A460÷细胞数量
(4) 按液体体积计算
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每毫升血清每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性(nmol/min/mL)=A460÷(ε×d)×V 反总÷V 样÷T= 36×A460
ε :氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数:7.5 L /mmol/cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 反总:
反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min
注意事项:
1、如果OD值小于0.01,适当加大提取用样本量;OD值大于0.8,粗酶液可适当稀释,或者减少提取用样本量。
2、样品蛋白质含量需要另外测定。
二胺氧化酶测试盒订购说明:
1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。
4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后,将底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。
运输说明:
极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。