可溶性淀粉合成酶活性检测试剂盒 微量法

可溶性淀粉合成酶（SSS）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1855
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取1瓶试剂二A加入8 mL试剂一，缓慢加热，逐渐升温至煮沸使其溶解，冷却后加入1支试剂二B和1支试剂二C混合溶解，这样可以分两批配制并且测定，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。

2. 试剂三：临用前取1瓶试剂三B加入5mL试剂三A溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。

3. 试剂四：临用前先离心，取12.5 μL试剂四加入4 mL溶解好的试剂三混合备用（约53T），现用现配，也可根据样本量按比例配制。

4. 试剂五：临用前取1瓶试剂五B加入8mL试剂五A和1支试剂五C溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。

5. 试剂六：临用前取1支加入208 μL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。

6. 试剂七：临用前加入2mL蒸馏水，用不完的试剂-20℃分装保存8周，避免反复冻融。

产品说明：
SSS（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。
SSS催化ADPG与淀粉引物（葡聚糖）反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，在反应体系中添加的丙 酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP⁺还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

实验实例：

1. 取约0.1g肝脏加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10分钟，取上清置冰上待测。之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算ΔA=A₂-A₁=0.3809-0.1959=0.185，按样本质量计算酶活得：

SSS活性（U/g 质量）=43.2×ΔA÷W=79.92 U/g 质量。

1. 取约0.1g冬青加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10分钟，取上清置冰上待测。之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算ΔA=A₂-A₁=1.3654-1.3601=0.0053，按样本质量计算酶活得：

SSS活性（U/g 质量）=43.2×ΔA÷W =2.2896 U/g 质量。
参考文献：
[1] Jiang H, Dian W, Wu P. Effect of high temperature on fine structure of amylopectin in rice endosperm by reducing the activity of the starch branching enzyme[J]. Phytochemistry, 2003, 63(1): 53-59.
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