详解单克隆抗体的制备过程（索莱宝实验室）

单克隆技术又名杂交瘤技术。由G.KÖhler和Milstein1975年创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。单克隆抗体的制备过程主要有以下六个环节，具体为抗原指标、免疫动物选择、免疫程序的确定、免疫、细胞杂交与选择培养。下面详细介绍单克隆抗体制备过程每一步的做法。1、抗原制备制备单克隆抗体的免疫抗原，从纯度上说虽不要求很高，但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加，同时可以减轻筛选的工作量。因此，免疫抗原是越纯越好，应根据所研究的抗原和...

查看更多

Western Blot内参抗体如何选择

内参抗体种类很多，比如beta-actin、beta-tubunlin、GAPDH、α-tubunlin等，那么针对自己的实验，我们该如何选择呢?下面简单介绍下选择内参抗体应遵循的原则：一.样本种属来源：先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。1、哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、LaminB、HistoneH3、Na,Katpase等。2、植物来源实验样本，则可以选择plantactin、Rubisco等。3、其他来源样本研究...

查看更多

提取植物dna步骤（索莱宝试剂盒）

试剂盒提取植物dna已经获得广泛应用。各个生化试剂厂家也都有了dna提取试剂盒产品。索莱宝作为国内生化试剂供应商提供了各类dna提取试剂盒。今天给大家介绍试剂盒提取植物dna步骤。当然是以索莱宝产植物基因组dna提取试剂盒产品为例。使用前先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1、植物组织预处理：取新鲜植物组织（不超过100mg）或干重组织（不超过20mg），于液氮中充分研磨细粉状，让液氮自然挥发。2、将研磨好的植物组...

查看更多

提取酵母质粒步骤跟方法

酵母质粒提取可以用试剂盒提取，也可以直接用裂壁酶处理后采用碱裂解法提取质粒。推荐使用索莱宝供应的酵母质粒提取试剂盒，无需使用酚、CCL4等有毒试剂，操作安全。下面我们就用索莱宝酵母质粒提取试剂盒为例讲解酵母质粒提取方法和步骤。1.接种单菌落(待检测酵母细胞)于25mLYNB(补加氨基酸营养物)培养基中，30℃振荡培养隔夜。2.第二天取一滴菌液于进行显微镜下观察,目镜用16,物镜用40倍观察细胞壁破碎前的状态,其成杆状,流动性比较下.3.取10ml的培养酵母菌液,5000g离心...

查看更多

提取DNA的方法（总结）

dna提取是一项经常要做的实验，下面我们就总结了四种dna提取方法并做详细说明和比较。一.浓盐法提取dna：A.利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M氯纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的CCL4一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及CCL4相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA钠盐沉淀出来.B.也可用0.15MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白...

查看更多

生物实验中琼脂粉常见问题

问题1：使用琼脂粉配置的MS培养基颜色明显变黄？影响实验？产品批次不一样，有些批次的琼脂粉就是显黄色，不是质量问题，不影响使用。进口产品也有直接指出琼脂粉是黄色为正常现象。问题2：凝胶强度？答：凝胶强度（1.5%）≥800g/cm2800-1200g/cm21.5g琼脂粉溶于100ml水，溶解凝固后要放置20℃恒温箱中静置10小时以上，再测定凝胶强度。与温度，水质等有关。一般琼脂粉和卡拉胶，夏季使用浓度要比冬季偏高。夏季温度高，保存时间久，可能会有部分降解，所以要达到同样凝胶...

查看更多

常用的刚果红培养基，你知道属于哪一类培养基吗？

培养基是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料。一般分为天然培养基、组合培养基、固体培养基、液体培养基等，那我们常用的刚果红培养基属于哪一类的？刚果红培养基属于哪一类培养基：刚果红培养基属于固体培养基,因为后能在培养基上看到因分解纤维素形成的透明圈,在液体培养基中不可能形成透明圈.是鉴定培养基,因为该培养基上也能生长其他微生物,例如有些自养型微生物就能在该培养基上生存；不过只有纤维素分解菌周围才会形成透明圈,从而将该菌落鉴定出来.也是区分选择培养基,例如在配...

查看更多

感受态细胞相关问题

如何选择合适的宿主菌：1、所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。2、如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉(lacZΔΜ15)。*0和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。3、要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7RNA聚合酶基因的菌株，如BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS。4、使用pGEM载体克隆大片段时(7-8kb)，经转化的菌株在30℃而不是在37℃生长，更有利于复苏。作简单的亚克隆连接实验，亚克隆转化效率的感受...

查看更多