雷帕霉素的免疫抑制作用

雷帕霉素的免疫抑制作用雷帕霉素雷帕霉素（Rapamycin，RAPA，RPM），又名Sirolimus，分子式为C51H79NO13,分子量为914.2，为白色固体结晶，熔点为183-185℃，亲脂性，溶解于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等有机溶剂，极微溶于水，属大环内酯类抗生素。起初RAPA被研究作为低毒性的抗真菌药物，1977年发现RAPA具有免疫抑制作用；1989年开始把RAPA作为治疗器官移植的排斥反应的新药进行试用。雷帕霉素(RAPA)通过不同的细胞因子受体阻断信号传导，阻...

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细胞冻存液的原理及配制方法

细胞冻存液的原理及配制方法细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在...

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BCA 蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白浓度的原理及特点

BCA蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白浓度的原理及特点碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫蓝色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS，TritonX-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用考马斯亮蓝（Bradford）蛋白浓度测定试剂盒。BCA法蛋白浓度检测比考马斯亮...

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非变性组织/细胞裂解液的应用

非变性组织/细胞裂解缓冲液内含非离子型去垢剂，能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。另外，有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点，这种情况应该使用非变性裂解。根据使用量，取每1ml裂解液加入10ulPMSF，使PMSF的终浓度为1mM。混匀备用（PMSF现用现加）。1、样品前处理：对于贴壁细胞：去除培养液，用PB...

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elisa间接法原理及实验步骤

ELISA实验中文酶联免疫吸附试验。可用于测定抗原，也可用于测定抗体。间接法是多种实验方法中常用方法。elisa间接法原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。elisa间接法操作步骤如下：（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。（2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。（3...

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elisa酶联免疫吸附实验直接法和间接法优缺点比较

因为ELISA酶联免疫吸附实验具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。已成为分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法。elisa可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent)；（2）酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate)；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不类型的检测方法。elisa可根据抗原抗体的结合情...

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ELISA试剂盒发展趋势

国内ELISA试剂盒发展起步较晚，1985年才研制了我国*批国产生化诊断试剂。但受益于医疗消费水平的提高、医疗体制改革的推动、国家产业政策的扶持，以及本身具有的一次性消费的特点，IVD行业将会以15%~20%的速度高速增长。特别是医改中的某些规定，让我们看到了体外诊断试剂未来极富想象力的创富空间。比其对基本药物的“零加成”的规定，使得基层医院药品收入顿时减少，于是化验单成为另一个开源对象，检验科的地位也将提升，而且随着例行体检的加快普及，体检的人数越来越多。新医改机会尽管落后...

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elisa试剂盒实验时显色可能碰到的问题以及解决办法

elisa试剂盒实验时的操作步骤有标准品的稀释、加样、温育、洗涤、显色等等，然而在显色这一步骤可能碰到的问题有：1、显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；2、加显色剂时溅出孔外造成液体回流。相应解决办法：1、显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；2、加样时保持显色剂不外流；3、A、B液应避免接触金属器械。显色是elisa实验的后一步温育反应,所以显色也是重要步骤之一。

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