elisa间接法原理及实验步骤

ELISA实验中文酶联免疫吸附试验。可用于测定抗原，也可用于测定抗体。间接法是多种实验方法中常用方法。elisa间接法原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。elisa间接法操作步骤如下：（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。（2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。（3...

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elisa酶联免疫吸附实验直接法和间接法优缺点比较

因为ELISA酶联免疫吸附实验具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。已成为分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法。elisa可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent)；（2）酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate)；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不类型的检测方法。elisa可根据抗原抗体的结合情...

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ELISA试剂盒发展趋势

国内ELISA试剂盒发展起步较晚，1985年才研制了我国*批国产生化诊断试剂。但受益于医疗消费水平的提高、医疗体制改革的推动、国家产业政策的扶持，以及本身具有的一次性消费的特点，IVD行业将会以15%~20%的速度高速增长。特别是医改中的某些规定，让我们看到了体外诊断试剂未来极富想象力的创富空间。比其对基本药物的“零加成”的规定，使得基层医院药品收入顿时减少，于是化验单成为另一个开源对象，检验科的地位也将提升，而且随着例行体检的加快普及，体检的人数越来越多。新医改机会尽管落后...

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elisa试剂盒实验时显色可能碰到的问题以及解决办法

elisa试剂盒实验时的操作步骤有标准品的稀释、加样、温育、洗涤、显色等等，然而在显色这一步骤可能碰到的问题有：1、显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；2、加显色剂时溅出孔外造成液体回流。相应解决办法：1、显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；2、加样时保持显色剂不外流；3、A、B液应避免接触金属器械。显色是elisa实验的后一步温育反应,所以显色也是重要步骤之一。

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elisa试剂盒测试要求

elisa试剂盒测试时要做好对照以及对实验条件做好选择。在进行正式试验之前，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:（1）固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行...

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ELISA试剂盒实验时关重要的步骤

elisa试剂盒是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。虽然elisa试剂盒的操作步骤看似简单，但没做到位的话就会影响实验的效果。所以elisa试剂盒实验时关重要的步骤有：*、重要的洗涤：不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的实验结果。如果未结合的材料残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。有必要的话，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。第二、关键的封闭：封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中...

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elisa试剂盒实验时前期准备

elisa试剂盒试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验方法。而在实验之前需要准备的东西有：1、准备各种实验仪器及材料（如：微量移液器、吸头、医用蒸馏水等）。2、浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1：4倍稀释成应用样品稀释液。3、使用前应将盒内各试剂取出，室温放置少30分钟。4、用应用样品稀释液来稀释样品，按照1：100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中，充分混匀待用。5、浓缩洗液与医用蒸馏水1：19倍稀释后成为应用洗涤液。elisa试剂盒实验前的准...

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elisa试剂盒洗涤对试验的影响

洗涤是elisa试剂盒测定过程中决定实验成败的一个关键步骤。洗涤可采用洗板机或手工洗涤两种方式，手工洗板则分为浸泡式和流水冲洗式洗涤。无论洗板方式如何，在向板孔内注液时应当避免气泡残留孔内，否则会因洗涤液难以进入孔中而影响洗涤效果。洗涤目的是去除反应体系中与反应无关的成分、未结合的酶结合物以及反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。由于抗原和抗体的包被通常是在碱性条件下与固相的疏水键相互作用而被动吸附于其上的，因此必须注意非离子去垢剂的使用浓度，常用的洗涤液是含0.05％...

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