磷酸化蛋白提取试剂盒的使用说明

发布日期： 2022-11-26

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　　磷酸化蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取磷酸化蛋白。磷酸化蛋白提取试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

　　操作方法：

　　1、组织总蛋白的提取

　　(1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的***酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF混匀，放置在冰上备用;

　　(2)称取0.1g的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入0.5-1ml 的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作;

　　(3)将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中，4 ℃ 12000g 离心30min;

　　(4)吸取上清至新的管中;

　　(5)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。

　　2、细胞总蛋白的提取

　　(1)裂解液的用量:107个细胞需要裂解液1ml;

　　(2)贴壁细胞:弃去培养基，用冷的PBS 洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞，将刮离的细胞裂解液移入EP管中，颠倒裂解20-30min;

　　(3)悬浮细胞:4℃ 400g 离心收集细胞，用冷的PBS洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，涡旋10s，放置冰上裂解10min，重复3-4次;

　　(4)裂解完毕之后，将细胞裂解液4℃12000g离心30min;

　　(5)将上清移入新的EP管中;进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。

　　(提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)

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