土壤淀*酶检测试剂盒 微量法

土壤淀*酶（S-AL）活性检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC1925

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取1瓶加入5 mL蒸馏水，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌或震荡至粉剂溶解，用不完的试剂2-8℃保存一周。

2、 标准品：10 mg麦芽糖。临用前加入1.38 mL蒸馏水配制成20 μmol/mL的储备液，2-8℃保存两周。

产品说明：

淀*酶（EC3.2.1.1）是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀*酶主要来自于微生物，是一种重要的酶制剂，广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。

淀*酶水解淀粉产生还原糖，可与3,5-二硝基水杨酸反应生成红棕色物质，在540nm处有特征吸收峰，颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、恒温培养箱/水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、30~50目筛、研钵、甲苯（不允许快递）。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至540nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2. 将20μmol/mL的麦芽糖储备液用蒸馏水稀释为 2、1、0.8、0.6、0.4μmol/mL的标准溶液备用。

3. 标准品浓度稀释表

备注：实验中每个标准管需60µL标准溶液。

4. 操作表：

三、土壤淀*酶活力的计算

1、标准曲线的绘制：

根据标准管的浓度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）

2、酶活的计算：

单位的定义：每天每g土样产生1μmol还原糖定义为一个土壤淀*酶活力。

S-AL（U/g 土样）= x×V反总÷W÷T=0.21×x÷W

V反总：酶促反应总体积，0.21mL；W：土样质量，g；T：反应时间，1d。

注意事项：

1、 当ΔA大于1.5时，建议将上清液稀释后再进行测定，注意在计算公式中乘以稀释倍数。

2、 若ΔA测定较小，增加反应的上清液体积或适当增加酶促反应时间，计算酶活时对公式进行修改。

3、 建议每次实验煮沸后的冷却时间保持一致，吸光值请于30min内测定完成。

实验实例：

1、 取0.05g土样于1.5mLEP管中，依次加入10μL甲苯、100μL试剂一、100μL试剂二为测定管；取0.05g土样于1.5mLEP管中，依次加入10μL甲苯、100μL试剂一、100μL蒸馏水为对照管，均放于37℃培养24h，后离心取上清再液稀释3倍，之后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定 =A测定管-A对照管=0.948-0.12=0.828，标准曲线：y=0.7604x-0.158，x=1.297，按土样质量计算酶活得：

S-AL（U/g 土样）=0.21×x÷W×3（稀释倍数）=0.21×1.297÷0.05×3（稀释倍数）=16.34 U/g 土样。

参考文献：

[1] Kathiresan K, Manivannan S. α-Amylase production by Penicillium fellutanum isolated from mangrove rhizosphere soil[J]. African journal of Biotechnology, 2006, 5(10).

[2] Ebregt A, Boldewijn J. Influence of heavy metals in spruce forest soil on amylase activity, CO 2 evolution from starch and soil respiration[J]. Plant and Soil, 1977, 47(1): 137-148.

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