嘌呤霉素

嘌呤霉素
货号：P8230
规格：25mg/100mg
英文名称 : Puromycin 
CAS : 58-58-2 
分子式 : C22H29N7O5·2HCl 
分子量 : 544.43 
储存条件 : -20℃ 
纯度 : ≥98%(TLC) 
单位 : 支 
外观（性状） : 白色或白中带有黄色的粉末

• 别名 : 二盐酸嘌呤霉素；盐酸盐
• 危险代码 : R:22

说明：蛋白质合成抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。

     （Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有的不成熟多肽。

     产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。

    在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

     抗菌机理在于作用于细菌核糖体30S亚单位，抑制细菌蛋白质的合成而发挥抗菌作用；也可导致mRNA遗传三连体密码阅读错误， 翻译形成无意义的蛋白质；也可依靠离子吸附于菌体表面，造成细胞膜损伤。导致膜通透性增加，使胞内一些重要生命物质外漏，使细菌死亡。

   溶解性：溶于水，参考浓度50mg/ml。

使用方法

1.建议使用浓度

     哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，佳浓度需要杀灭曲线来确定；

     大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。注：使用筛选大肠杆菌稳转株需要的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。

2.溶解方法

    用蒸馏水溶解配制成50 mg/ml的母液，经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的储存液。

3. 杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）

    有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的低浓度关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线（kill curve）。

    1） Day 1：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育；

    2） Day 2：a）准备筛选培养基：含不同浓度的新鲜培养基（如0-15μg/mL，少5个梯度）；b）往孵育后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞；

   3） Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。

   4） 根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基；

   5） 每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物低浓度。

4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选

    等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。

    1）细胞转染48h后，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度的新鲜培养基中培养。

注意：当细胞处于活跃期时，抗生素作用明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。好进行细胞分盘使其密度不超过25%。

    2）每隔2-3天，移除和更换含有的培养基。

    3）筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。注意：每日进行细胞生长状态的观察。的筛选少需要48h，有效浓度的筛选周期一般在3-10天。

    4）转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）为有毒化合物，操作时请小心拿放。

Puromycin dihydrochloride hydrate
Catalog Number： P8230
Specifications
Purity:  ≥98%(TLC)
Physical Appearance: White to off-white powder
Storage
Desiccate at -20° C
Properties
Molecular Weight:  544.43
Molecular Formula:  C22H29N7O5·2HCl
Solubility: Soluble in water (50 mg/ml)
Product Description
Puromycin belongs to the amino-nucleoside family of antibiotics and is isolated from Streptomyces alboniger. Since the
partial structure of this antibiotic showed it to be a purine derivative, puromycin was assigned as its generic name.
Puromycin is a broad spectrum antibiotic and antibacterial agent. It is active against Gram-positive microorganisms,
less active against acid-fast bacilli, and weakly active against Gram-negative microorganisms.It acts very quickly and
can kill 99% of the cells within 2 days. It also exhibits antitumor activity in studies on brain tumor cells.
Puromycin is a protein synthesis inhibitor that causes premature chain termination by acting as an analog of the
3’-terminal end of aminoacyl-tRNA. It has been used to study transcriptional regulatory mechanisms that control the
sequential and coordinate expression of genes during cell differentiation.
Usage:
A stock solution of 10 mg/mL(in water ) should be sterilized by filtration through a 0.22um filter and stored frozen. It
is tested on HeLa cells for cell growth arrest and selection of cells after transfection of the pac resistance gene. Hela
cells were found to be resistant to a concentration of 0.1-0.3ug/ml and sensitive to a concentration in the range of 1-10
ug/ml.
For selection of pac-containing colonies after transfection it is better to use the antibiotic supplemented in the cell
medium 2 days after transfection, in the range of 1-6 ug/ml. Colonies will appear 7-10 days after transfection.
The optimal working concentration of puromycin varies between cell lines. Usually, the working concentration
for eukaryote cell culture is 1-10ug/ml.
Storage/Stability
Store the product at –20 °C. Under these conditions, the product remains active for two years.

订购说明：
1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日新价格为准。 
4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后，将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。

运输说明：
1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
3、常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。

产品实物图：