蛋白质电泳试剂Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶

蛋白质电泳试剂Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
货号 ：P1320
规格 ：25 块/50 块/100 块 PAGE 凝胶

产品内容 ：

    本产品所提供的 APS（过硫酸铵）为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制成 10%APS 溶液（0.5g APS加 5ml 双蒸水） ，将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可放置 4℃保存两周。

产品简介 ：
    常规的 Tris-SDS-PAGE 电泳的只能分辨大分子蛋白， 对于相对分子量小的， 尤其是 10 kD 以下的蛋白分辨率极低。而 Tricine-SDS-PAGE 可以很好的分离分子量在 1-10 kD 的蛋白及多肽，成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。本产品包括 Tricine-SDS- PAGE 凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的凝胶，方便、快捷，电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。 

    聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)或核黄素(即vitamin B2)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)
    SDS－PAGE是在要电泳的样品中加入含有SDS和β-巯基乙醇(或者DTT)的样品处理液，SDS可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构，β-巯基乙醇可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构。SDS还与蛋白质结合使蛋白质－SDS复合物上带有大量的负电荷，这时各种蛋白质分子本身的电荷*被SDS掩盖。这样电泳时，就消除了各种蛋白质本身电荷及结构上的差异，电泳速度只是与蛋白质分子量有关。用本法测定蛋白质的分子量只需根据待测蛋白质在已知分子量的标准蛋白质图中的位置，就能得知分子量。
 

注意事项 ：
    1、 10%APS 配制后分装-20 度保存。 APS 溶液不稳定， 应尽量减少室温存放时间， 每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换，使用-20 度保存的 10%APS。
    2、在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
    3、在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。
    4、丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
    5、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。
 

配胶说明 ：
    根据目的蛋白分子量大小选择合适的 PAGE 分离胶配制浓度，凝胶浓度配方参考附表。

I 配制分离胶
    1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 6%C 、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。
    2、加入 10%APS 和 TEMED，立即涡旋混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。
    3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液（1 mm mini-gel，分离胶溶液加约 4 ml ） ，然后在分离胶溶液上轻轻 覆盖一层 1-3 cm 的水层，使凝胶表面保持平整。
    4、静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
II  配制夹层胶
    去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。
    1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。
    2、加入 10%过硫酸铵和 TEMED，立即涡旋混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。
    3、将适量的夹层胶溶液迅速加分离胶的上面（对于 1 mm 的 mini-gel，夹层胶溶液加约 1 ml ） ， 然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层，使凝胶表面保持平整。
4、静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
III 配制浓缩胶
   去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
   1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。
   2、加入 10%过硫酸铵和 TEMED，立即涡旋混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。
   3、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
   4、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
   5、进行电泳操作。
IV 电泳
   将电泳槽放入 4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液（T1225） ，内槽加入阴极缓冲液（T1215） ，30V 预电泳10min，将样品（已经过 Tricine 上样缓冲液 P1325 处理）加入点样孔后 30V 电泳 1 小时，100V 电泳溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。

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参考文献：

《A deuterohemin peptide protects a transgenic Caenorhabditis elegans model of Alzheimer’s disease by inhibiting Aβ1–42 aggregation》 作者:Jia Xu，Ye Yuan，Ruining Zhang，Yanhui Song，Tianzhuo Sui，Jiaqi Wang，Chonghan Wang，Yujia Chen，Shuwen Guan，Liping Wang 期刊:Bioorganic Chemistry 影响因子:2.141 PMID:30428413