蛋白质提取试剂RIPA组织/细胞裂解液

蛋白质提取试剂RIPA组织/细胞裂解液
货号 ：R0020
规格 ：100ml
本产品配有一支 PMSF（100mM，1.5ml）
保存 ：RIPA 裂解液 4℃保存，PMSF -20℃保存。

产品简介 ：

    RIPA 组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜（包括核膜） 。本试剂提取的蛋白为可溶性总蛋白。

使用说明 ：
    如发现 RIPA 有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
    根据使用量， 取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF， 使 PMSF 的终浓度为 1mM， 混匀备用 （PMSF 现用现加） 。
1、样品前处理：
   a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
   b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液，用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 5-10×10 5 细胞/管，然后再裂解。
   c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。用玻璃匀浆器匀浆，直充分裂解。
2、后处理：
   将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟， 取上清， 即可进行后续的蛋白浓度测定、 SDS-PAGE、 Western blotting 和免疫沉淀等操作。

注意事项 ：
     1、 使用本裂解液可以裂解细胞核，释放出核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可入加少量 SDS（1%） ，煮沸后离心测浓度。
     2、 本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒，请选择 BCA 法或者 Lowry 法检测蛋白浓度。
     3、 如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。

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蛋白质提取试剂RIPA组织/细胞裂解液

 
参考文献：
《Liraglutide reduces hepatic glucolipotoxicity?induced liver cell apoptosis through NRF2 signaling in Zucker diabetic fatty rats》 作者:Jun Guo，Cai Li，Chunxiao Yang，Bing Li，Jie Wei，Yajun Lin，Peng Ye，Gang Hu，Jian Li 期刊:Molecular Medicine Reports 影响因子:1.851 PMID:29693190
《Long noncoding RNA ENST00000413528 sponges microRNA‐593‐5p to modulate human glioma growth via polo‐like kinase 1》 作者:Ren Zhang, Ruo‐Lun Wei, Wei Du, Li‐Wei Zhang, Tao Du, Ya‐Dong Geng, Xin‐ting Wei 期刊:CNS Neuroscience & Therapeutics 影响因子:4.458 PMID:30924320
《Sphingomyelin synthase 2 promotes H2O2-induced endothelial dysfunction by activating the Wnt/β-catenin signaling pathway》 作者:Panpan Zhang,Lingyue Hua,Huan Hou, Xingyue Du,Zhiqiang He, Menghan Liu, Xiaojuan Hu, Nianlong Yan 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影响因子:2.928 PMID:30272329