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产品名称:

丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒 其他系列

产品品牌: 索莱宝 价格: 560
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-06
丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒 其他系列 可见分光光度法可见测定意义:PK(EC 2.7.1.40)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化糖酵解过程中的Z后一步反应,是糖酵解过程中的主要限速酶之一,也是产生ATP的关键酶之一。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0540
规格50管/48样供货周期现货
主要用途丙酮酸激酶(PK)活性测定应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒 其他系列

货号:BC0540

规格:50管/48样

 

产品简介 :
    PK(EC 2.7.1.40)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化糖酵解过程中的后一步反应,是糖酵解过程中的主要限速酶之一,也是产生 ATP 的关键酶之一,因此测定 PK 活性具有重要意义。
    PK 催化磷酸烯醇式丙酮酸和 ADP 生成 ATP 和丙酮酸, 乳酸脱氢酶进一步催化 NADH 和丙酮酸生成乳酸和 NAD + ,在 340nm 下测定 NADH 下降速率,即可反映 PK 活性。
试验中所需的仪器和试剂:
    紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水


产品内容 :
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 15 mL×3 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×3 支,-20℃保存;
试剂三:粉剂×3 支,-20℃保存;
试剂四:粉剂×3 支,-20℃保存;临用前每支加入 500µL 双蒸水充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂五:液体×3 支,4℃保存;临用前每支加入 300µL 双蒸水充分溶解备用,用不完的试剂仍 4℃保存;
PK 工作液的配制:取试剂一、试剂二和试剂三各一支,将试剂二和试剂三依次转移试剂一中,充分溶解待用,这样可以分三批测定,防止试剂失效。


操作步骤 :
一 、 样品 的前处理 :
(1) 细菌或细胞处理:
收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 200 万细菌或细胞加入 400µL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 200W,工作 3s,间歇 10s,工作 35 次),8000g,4℃,离心 10min,取上清,置冰上待测。
(2) 组织处理:
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;8000g ,4℃,离心 10min,取上清,置冰上待测。
(3) 血清(浆)样品:直接检测
二 、 测定操作表 :
试剂名称(µL)  测定管
PK 工作液  900
试剂四 30
试剂五  15
充分混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)水浴 5 分钟
样本  30
将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,加样本的同时开始计时,在 340nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1,比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴中准确反应 2 分钟; 迅速取出比色皿并擦干, 340 nm 下比色, 记录 2 分 20 秒时的吸光度 A2, 计算A=A1-A2。


注意事项 :
1、 测定过程中样本和所有试剂在冰上放置,以免变性和失活。
2、比色皿中反应液的温度必须保持 37℃或 25℃,取小烧杯一只装入一定量的 37℃或 25℃蒸馏水,将此烧杯放入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
3、好两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。


PK活单位的计算 :
1 、 血清 ( 浆 )PK  活力的计算:
单位定义:每升血清(浆)在反应体系中每分钟消耗 1 µmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。


计算公式:
PK(U/L)=反应总体积(975µL)÷样本体积(30µL)÷反应时间(2min)÷NADH 消光系数(6.22×10 -3 )×?A=2613 ×?A
2 、 组织中 PK  活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PK(U/mg prot)=反应总体积(975µL)÷样本体积(30µL)÷反应时间(2min)÷NADH 消光系数(6.22×10 -3 )×?A÷蛋白浓度(mg/mL)=2613×?A ÷蛋白浓度(mg/mL)
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PK(U/g 鲜重)=反应总体积(975µL)÷样本体积(30µL)÷反应时间(2min)÷NADH 消光系数(6.22×10 -3 )×?A ÷样本鲜重(g/mL)=2613× ?A ÷样本鲜重(g/mL)


3 、 细菌或细胞中 PK  活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PK(U/mg prot)=反应总体积(975µL)÷样本体积(30µL)÷反应时间(2min)÷NADH 消光系数(6.22×10 -3 )×?A÷蛋白浓度(mg/mL)=2613×?A ÷蛋白浓度(mg/mL)
(2)按细菌或细胞密度计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PK(U/10 4 cell)=反应总体积(975µL)÷样本体积(30µL)÷反应时间(2min)÷NADH 消光系数(6.22×10 -3 )×?A ÷细菌或细胞密度(10 4 /mL)=2613×?A ÷细菌或细胞密度(10 4 /mL)

 相关文献:

 《Galangin and Pinocembrin from Propolis Ameliorate Insulin Resistance in HepG2 Cells via Regulating Akt/mTOR Signaling》 作者:Yinkang Liu, Xiali Liang,Gensheng Zhang,Lingjie Kong,Wenjun Peng and Hongcheng Zhang 期刊:Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 影响因子:1.984 PMID:30420897
《Combination of shikonin with paclitaxel overcomes multidrug resistance in human ovarian carcinoma cells in a P-gp-independent manner through enhanced ROS generation》 作者:Zhu Wang, Jianhua Yin, Mingxing Li, Jing Shen, Zhangang Xiao, Yueshui Zhao, Chengliang Huang, Hanyu Zhang, Zhuo Zhang, Chi Hin Cho & Xu Wu  期刊:Chin Med 影响因子:2.265 PMID:30911326

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